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王一琇新蟲 (初入文壇)
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求助做過鏈霉菌接合轉(zhuǎn)移的同學(xué)們呀 已有1人參與
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我用PKC1139質(zhì)粒進(jìn)行屬間接合轉(zhuǎn)移，三個多月了都沒有結(jié)合子生長不知道是什么問題呀。現(xiàn)在在進(jìn)行條件摸索和體系建立。 就是孢子過濾洗脫后40℃，45℃，50℃，55℃這幾個條件熱激10分鐘后，28攝氏度震蕩培養(yǎng)2.4.6小時后，與生長到OD600=0.4-0.5的大腸桿菌1:1混合以后涂在含有20毫摩爾氯化鎂的MS培養(yǎng)基上，放置16.18.20.22小時后涂相應(yīng)萘啶酮酸和安普霉素，抗生素濃度都是做過敏感性實(shí)驗(yàn)的應(yīng)該沒問題，但是一直沒有結(jié)合子生長，是我操作有問題還是這個質(zhì)粒在我的菌體里不實(shí)用呀做過的小伙伴幫我看一下啦 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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2樓2021-08-12 10:50:04
王一琇
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能幫我分析一下具體是什么問題嗎，感覺已經(jīng)找不到能調(diào)試的條件了
3樓2021-08-13 10:42:58
4樓2021-08-28 17:09:16
若雪心漩
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先用pset152這種整合型質(zhì)粒摸索條件，提高接合轉(zhuǎn)移條件，再用pkc1139這種可能才能長少量接合子，直接用1139很難 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
5樓2021-10-21 11:27:21
鉛筆的訴說
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我也花了大半年的時間磨出來的，說說我的經(jīng)驗(yàn)吧。首先是大腸桿菌的狀態(tài)，供體的狀態(tài)一定要好，不然做不出來的，一般我建議搖到0.6，用5毫升做供體。其次是受體，我之前用孢子一直做不出來，之后用菌絲體做出來了，菌絲體的接合轉(zhuǎn)移比孢子效率高，但你得提前摸好菌絲體在不同時間段對應(yīng)的OD值以及對應(yīng)菌落數(shù)，這個過程比較痛苦，因?yàn)橐煌５娜樱瑴y生長曲線，（這些得自己查文獻(xiàn)，文獻(xiàn)積累很重要），之后就是供受比，抗生素濃度，覆蓋時間等條件了。記得多看文獻(xiàn)！祝你順利 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
6樓2021-10-29 22:16:10
鉛筆的訴說
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7樓2021-10-29 22:17:45
鉛筆的訴說
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還有就是要加氯化鈣，有文獻(xiàn)的，好多是研究接合轉(zhuǎn)移的條件優(yōu)化的，多看看，總結(jié)一下。你的痛苦我經(jīng)歷過 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
8樓2021-10-29 22:22:26
Z-DanXun
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9樓2023-05-24 23:02:03
飛魚沖沖沖
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【答案】應(yīng)助回帖
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您好，想請教一下，我看您說用菌絲體做出來了，是不是說明孢子萌發(fā)不是結(jié)合轉(zhuǎn)移的前提呀，所以孢子預(yù)萌發(fā)培養(yǎng)基也就沒必要篩選； 然后也想知道如果想要篩孢子預(yù)萌發(fā)培養(yǎng)基，是要在不同的液體培養(yǎng)基培養(yǎng)后每隔一段時間在顯微鏡下觀察孢子萌發(fā)情況，比較不同培養(yǎng)基下的萌發(fā)速度和數(shù)量嗎？ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
10樓2024-10-13 01:36:20
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