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[求助]
求助做過鏈霉菌接合轉(zhuǎn)移的同學們呀 已有1人參與
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我用PKC1139質(zhì)粒進行屬間接合轉(zhuǎn)移,三個多月了都沒有結(jié)合子生長不知道是什么問題呀。現(xiàn)在在進行條件摸索和體系建立。 就是孢子過濾洗脫后40℃,45℃,50℃,55℃這幾個條件熱激10分鐘后,28攝氏度震蕩培養(yǎng)2.4.6小時后,與生長到OD600=0.4-0.5的大腸桿菌1:1混合以后涂在含有20毫摩爾氯化鎂的MS培養(yǎng)基上,放置16.18.20.22小時后涂相應萘啶酮酸和安普霉素,抗生素濃度都是做過敏感性實驗的應該沒問題,但是一直沒有結(jié)合子生長,是我操作有問題還是這個質(zhì)粒在我的菌體里不實用呀做過的小伙伴幫我看一下啦 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
新蟲 (初入文壇)
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您好,想請教一下,我看您說用菌絲體做出來了,是不是說明孢子萌發(fā)不是結(jié)合轉(zhuǎn)移的前提呀,所以孢子預萌發(fā)培養(yǎng)基也就沒必要篩選; 然后也想知道如果想要篩孢子預萌發(fā)培養(yǎng)基,是要在不同的液體培養(yǎng)基培養(yǎng)后每隔一段時間在顯微鏡下觀察孢子萌發(fā)情況,比較不同培養(yǎng)基下的萌發(fā)速度和數(shù)量嗎? 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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