 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 10 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 2950 | 回復(fù): 9 | ||
| 【懸賞金幣】回答本帖問題，作者王一琇將贈送您 5 個金幣 | ||
王一琇新蟲 (初入文壇)
|
[求助]
求助做過鏈霉菌接合轉(zhuǎn)移的同學(xué)們呀 已有1人參與
|
|
|
我用PKC1139質(zhì)粒進行屬間接合轉(zhuǎn)移，三個多月了都沒有結(jié)合子生長不知道是什么問題呀�，F(xiàn)在在進行條件摸索和體系建立。 就是孢子過濾洗脫后40℃，45℃，50℃，55℃這幾個條件熱激10分鐘后，28攝氏度震蕩培養(yǎng)2.4.6小時后，與生長到OD600=0.4-0.5的大腸桿菌1:1混合以后涂在含有20毫摩爾氯化鎂的MS培養(yǎng)基上，放置16.18.20.22小時后涂相應(yīng)萘啶酮酸和安普霉素，抗生素濃度都是做過敏感性實驗的應(yīng)該沒問題，但是一直沒有結(jié)合子生長，是我操作有問題還是這個質(zhì)粒在我的菌體里不實用呀做過的小伙伴幫我看一下啦 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
接受26屆調(diào)劑生
已經(jīng)有13人回復(fù)
-
調(diào)劑的同學(xué)，走過路過，不要錯過
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
276求調(diào)劑 本科天津工業(yè)大學(xué) 一志愿北京化工大學(xué)0855
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
售瀆SCI文章，我:8⊙ 55 1⊙ 54。備注【⊙=0】
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
售瀆SCI文章，我:8⊙ 55 1⊙ 54。備注【⊙=0】
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
求調(diào)劑推薦
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
26申博自薦
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
進入個人成果庫好難，一下午都沒進去
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
求調(diào)劑 一志愿蘇州大學(xué)，0856化工323分 | 本科應(yīng)化 | 有專利/競賽/科研助手經(jīng)歷 |
已經(jīng)有6人回復(fù)
 本帖僅樓主可見 |
2樓2021-08-12 10:50:04
王一琇
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 28
- 帖子: 7
- 在線: 2.6小時
- 蟲號: 20931641
- 注冊: 2020-02-17
- 專業(yè): 微生物遺傳育種學(xué)
能幫我分析一下具體是什么問題嗎，感覺已經(jīng)找不到能調(diào)試的條件了
3樓2021-08-13 10:42:58
4樓2021-08-28 17:09:16
若雪心漩
新蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 359.9
- 帖子: 128
- 在線: 125.3小時
- 蟲號: 4950852
- 注冊: 2016-08-28
- 性別: MM
- 專業(yè): 微生物生態(tài)學(xué)
|
先用pset152這種整合型質(zhì)粒摸索條件，提高接合轉(zhuǎn)移條件，再用pkc1139這種可能才能長少量接合子，直接用1139很難 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
5樓2021-10-21 11:27:21
鉛筆的訴說
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 178.8
- 散金: 10
- 帖子: 45
- 在線: 3.8小時
- 蟲號: 5138864
- 注冊: 2016-10-19
- 專業(yè): 病原細(xì)菌與放線菌生物學(xué)
|
我也花了大半年的時間磨出來的，說說我的經(jīng)驗吧。首先是大腸桿菌的狀態(tài)，供體的狀態(tài)一定要好，不然做不出來的，一般我建議搖到0.6，用5毫升做供體。其次是受體，我之前用孢子一直做不出來，之后用菌絲體做出來了，菌絲體的接合轉(zhuǎn)移比孢子效率高，但你得提前摸好菌絲體在不同時間段對應(yīng)的OD值以及對應(yīng)菌落數(shù)，這個過程比較痛苦，因為要不停的取樣，測生長曲線，（這些得自己查文獻，文獻積累很重要），之后就是供受比，抗生素濃度，覆蓋時間等條件了。記得多看文獻！祝你順利 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
6樓2021-10-29 22:16:10
鉛筆的訴說
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 178.8
- 散金: 10
- 帖子: 45
- 在線: 3.8小時
- 蟲號: 5138864
- 注冊: 2016-10-19
- 專業(yè): 病原細(xì)菌與放線菌生物學(xué)
7樓2021-10-29 22:17:45
鉛筆的訴說
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 178.8
- 散金: 10
- 帖子: 45
- 在線: 3.8小時
- 蟲號: 5138864
- 注冊: 2016-10-19
- 專業(yè): 病原細(xì)菌與放線菌生物學(xué)
還有就是要加氯化鈣，有文獻的，好多是研究接合轉(zhuǎn)移的條件優(yōu)化的，多看看，總結(jié)一下。你的痛苦我經(jīng)歷過 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
8樓2021-10-29 22:22:26
Z-DanXun
新蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 164.6
- 帖子: 97
- 在線: 20.2小時
- 蟲號: 25357419
- 注冊: 2021-02-27
- 性別: MM
- 專業(yè): 植物營養(yǎng)學(xué)
9樓2023-05-24 23:02:03
飛魚沖沖沖
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 19.1
- 散金: 10
- 沙發(fā): 1
- 帖子: 19
- 在線: 1.9小時
- 蟲號: 35687339
- 注冊: 2024-10-07
- 專業(yè): 植物病理學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
|
您好，想請教一下，我看您說用菌絲體做出來了，是不是說明孢子萌發(fā)不是結(jié)合轉(zhuǎn)移的前提呀，所以孢子預(yù)萌發(fā)培養(yǎng)基也就沒必要篩選； 然后也想知道如果想要篩孢子預(yù)萌發(fā)培養(yǎng)基，是要在不同的液體培養(yǎng)基培養(yǎng)后每隔一段時間在顯微鏡下觀察孢子萌發(fā)情況，比較不同培養(yǎng)基下的萌發(fā)速度和數(shù)量嗎？ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
10樓2024-10-13 01:36:20
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 王一琇 的主題更新
| 10 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 求調(diào)劑 一志愿蘇州大學(xué)，0856化工323分 | 本科應(yīng)化 | 有專利/競賽/科研助手經(jīng)歷 | +5 | 橙子cyx 2026-03-06 | 6/300 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 085600材料與化工調(diào)劑 280分 +13 | yyqqhh 2026-03-03 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 材料專碩調(diào)劑 +4 | 慕辰123 2026-03-05 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 0856材料與化工求調(diào)劑！ +5 | 化工考生111 2026-03-04 | 11/550 |
|
|
[考研] 328求調(diào)劑 +6 | vuzhdkfjkx 2026-03-04 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 085602 293分求調(diào)劑 +3 | SivanNano. 2026-03-05 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料調(diào)劑 +4 | L9370 2026-03-05 | 4/200 |
|
|
|
[考博] 申博 +3 | 添菜了哈 2026-03-04 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +3 | 曼殊2266 2026-03-04 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿314求調(diào)劑 +7 | 202111120625 2026-03-03 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 281求調(diào)劑 +3 | 我是小小蔥蔥 2026-03-03 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 347分電子信息專碩求調(diào)劑 +3 | 咕嘟咕嘟1 2026-03-03 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑 +4 | G212 2026-03-03 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 293求調(diào)劑 +4 | 是樂渝哇 2026-03-03 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 環(huán)境調(diào)劑 +8 | chenhanheng 2026-03-02 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 298求調(diào)劑 +7 | axyz3 2026-02-28 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 【2026 碩士調(diào)劑】課題組 招收調(diào)劑生 +3 | 考研版棒棒 2026-03-02 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 285求調(diào)劑 +9 | 滿頭大汗的學(xué)生 2026-02-28 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 261求調(diào)劑 +3 | 陸lh 2026-03-01 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 284求調(diào)劑 +10 | 天下熯 2026-02-28 | 11/550 |
|