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| 【懸賞金幣】回答本帖問題，作者王一琇將贈送您 5 個金幣 | |||
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[求助]
求助做過鏈霉菌接合轉移的同學們呀 已有1人參與
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我用PKC1139質粒進行屬間接合轉移，三個多月了都沒有結合子生長不知道是什么問題呀。現(xiàn)在在進行條件摸索和體系建立。 就是孢子過濾洗脫后40℃，45℃，50℃，55℃這幾個條件熱激10分鐘后，28攝氏度震蕩培養(yǎng)2.4.6小時后，與生長到OD600=0.4-0.5的大腸桿菌1:1混合以后涂在含有20毫摩爾氯化鎂的MS培養(yǎng)基上，放置16.18.20.22小時后涂相應萘啶酮酸和安普霉素，抗生素濃度都是做過敏感性實驗的應該沒問題，但是一直沒有結合子生長，是我操作有問題還是這個質粒在我的菌體里不實用呀做過的小伙伴幫我看一下啦 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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鉛筆的訴說
新蟲 (初入文壇)
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- 專業(yè): 病原細菌與放線菌生物學
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我也花了大半年的時間磨出來的，說說我的經(jīng)驗吧。首先是大腸桿菌的狀態(tài)，供體的狀態(tài)一定要好，不然做不出來的，一般我建議搖到0.6，用5毫升做供體。其次是受體，我之前用孢子一直做不出來，之后用菌絲體做出來了，菌絲體的接合轉移比孢子效率高，但你得提前摸好菌絲體在不同時間段對應的OD值以及對應菌落數(shù)，這個過程比較痛苦，因為要不停的取樣，測生長曲線，（這些得自己查文獻，文獻積累很重要），之后就是供受比，抗生素濃度，覆蓋時間等條件了。記得多看文獻！祝你順利 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
6樓2021-10-29 22:16:10
 本帖僅樓主可見 |
2樓2021-08-12 10:50:04
能幫我分析一下具體是什么問題嗎，感覺已經(jīng)找不到能調試的條件了3樓2021-08-13 10:42:58
4樓2021-08-28 17:09:16
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