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victor_u新蟲 (小有名氣)
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[交流]
關(guān)于使用高壓破碎機提取蛋白 已有9人參與
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我是做蛋白原核表達(dá)的，誘導(dǎo)表達(dá)之后用的是超聲破碎，破碎效果一直不太好，破好幾遍菌液還是很渾，產(chǎn)熱也特別嚴(yán)重，而且破一批樣品需要一下午，比較浪費時間。 最近正好隔壁實驗室新買了一臺高壓細(xì)胞破碎機UH-06，借用了一下發(fā)現(xiàn)效果還不錯，在這里分享一下心得體會。 我破的是大腸桿菌，使用的時候壓力加到了800 bar，以這個壓力破碎了兩遍樣品就很清澈了，而且跑電泳之后發(fā)現(xiàn)蛋白量也比超聲破碎時高了一些，分析之后認(rèn)為應(yīng)該是高壓破碎產(chǎn)熱少，出料溫度比較低，所以對蛋白的影響會小一些。而使用超聲破碎儀破碎之后樣品的溫度通常會很高，放冰浴里效果也不大。 我的樣品量大概有100 mL，在800bar條件下用高壓破碎機破兩遍也只要10分鐘，跟超聲破碎比起來就會節(jié)省很多時間。 總體用下來還是感覺高壓破碎比超聲破碎用起來方便一些。但大部分實驗室現(xiàn)在都用的是超聲破碎，高壓破碎機好像知道的也比較少？ 有其他用過高壓細(xì)胞破碎機的大神們也可以交流一下使用心得。 |
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Fishsh
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高壓破碎要注意3點:1.壓力都會轉(zhuǎn)化成熱能，高壓腔瞬間升溫很快，物料流速近1000米/秒的速度，目前科技手段沒有辦法真正實現(xiàn)高壓腔低溫，所以能達(dá)到破碎效果時，使用壓力越低產(chǎn)熱越少是最有意義的！千萬別迷信什么品牌壓力多高的參數(shù)！2.高壓時物料中的顆粒物就像子彈打靶一樣，所以機器中破碎閥的材質(zhì)非常重要，破碎酵母一定要用金剛石，普通硬質(zhì)合金一下就磨損掉！3.壓力釋放距離越短破碎效果就會越好，所以如果你夠?qū)I(yè)，可以看看閥的邊寬，越小越好，用一段時間看看有沒有磨痕，正常的都是鏡面加工的！ 以上僅供參考 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
9樓2019-10-27 16:42:30
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我本科用過聚能的，體積很大，好處是能用小量，后來用過加拿大ats的，破大腸還可以，體積也小，不過一年要花幾千買那個閥門，破酵母不太行，估計只有百分之三四十的破碎率了 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
8樓2019-10-25 21:48:14
MAS_rice
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請問你的100ml是菌體100ml還是離心后重懸的100ml？ 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
2樓2019-08-26 11:56:58
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3樓2019-08-26 23:25:55
victor_u
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6樓2019-09-16 14:41:45
victor_u
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7樓2019-10-24 16:44:54
clearlove778
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高壓破碎機的效率比超聲快很多，同樣的樣品做實驗超聲需要45分鐘而且探頭很容易壞，高壓破碎機5分鐘就能達(dá)到破碎效果，還是比較喜歡使用的操作也比較簡單 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
10樓2020-03-04 10:26:24
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