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victor_u新蟲 (小有名氣)
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[交流]
關(guān)于使用高壓破碎機提取蛋白 已有9人參與
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我是做蛋白原核表達的，誘導(dǎo)表達之后用的是超聲破碎，破碎效果一直不太好，破好幾遍菌液還是很渾，產(chǎn)熱也特別嚴重，而且破一批樣品需要一下午，比較浪費時間。 最近正好隔壁實驗室新買了一臺高壓細胞破碎機UH-06，借用了一下發(fā)現(xiàn)效果還不錯，在這里分享一下心得體會。 我破的是大腸桿菌，使用的時候壓力加到了800 bar，以這個壓力破碎了兩遍樣品就很清澈了，而且跑電泳之后發(fā)現(xiàn)蛋白量也比超聲破碎時高了一些，分析之后認為應(yīng)該是高壓破碎產(chǎn)熱少，出料溫度比較低，所以對蛋白的影響會小一些。而使用超聲破碎儀破碎之后樣品的溫度通常會很高，放冰浴里效果也不大。 我的樣品量大概有100 mL，在800bar條件下用高壓破碎機破兩遍也只要10分鐘，跟超聲破碎比起來就會節(jié)省很多時間。 總體用下來還是感覺高壓破碎比超聲破碎用起來方便一些。但大部分實驗室現(xiàn)在都用的是超聲破碎，高壓破碎機好像知道的也比較少？ 有其他用過高壓細胞破碎機的大神們也可以交流一下使用心得。 |
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3樓2019-08-26 23:25:55
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