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[交流]
關于使用高壓破碎機提取蛋白 已有9人參與
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我是做蛋白原核表達的,誘導表達之后用的是超聲破碎,破碎效果一直不太好,破好幾遍菌液還是很渾,產(chǎn)熱也特別嚴重,而且破一批樣品需要一下午,比較浪費時間。 最近正好隔壁實驗室新買了一臺高壓細胞破碎機UH-06,借用了一下發(fā)現(xiàn)效果還不錯,在這里分享一下心得體會。 我破的是大腸桿菌,使用的時候壓力加到了800 bar,以這個壓力破碎了兩遍樣品就很清澈了,而且跑電泳之后發(fā)現(xiàn)蛋白量也比超聲破碎時高了一些,分析之后認為應該是高壓破碎產(chǎn)熱少,出料溫度比較低,所以對蛋白的影響會小一些。而使用超聲破碎儀破碎之后樣品的溫度通常會很高,放冰浴里效果也不大。 我的樣品量大概有100 mL,在800bar條件下用高壓破碎機破兩遍也只要10分鐘,跟超聲破碎比起來就會節(jié)省很多時間。 總體用下來還是感覺高壓破碎比超聲破碎用起來方便一些。但大部分實驗室現(xiàn)在都用的是超聲破碎,高壓破碎機好像知道的也比較少? 有其他用過高壓細胞破碎機的大神們也可以交流一下使用心得。 |
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