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流氓額怕水新蟲(chóng) (小有名氣)
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[交流]
羧基聚苯乙烯微球表面抗體修飾 已有3人參與
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請(qǐng)問(wèn)大家是怎么在微球表面進(jìn)行抗體修飾的呀?我是在在MES緩沖液中加入100μl 羧基修飾的PS球,然后用EDC/NHS進(jìn)行活化處理,洗球后在加入0.5mg/ml的單抗,4℃保存一夜。但是后面檢測(cè)蛋白并沒(méi)有信號(hào)感覺(jué)是抗體沒(méi)有修飾上去,不知道有沒(méi)有大佬做過(guò)類(lèi)似的修飾,還請(qǐng)幫助![]() |
| 一般常規(guī)抗體偶聯(lián)不需要4℃,除非你的微球供應(yīng)商操作手冊(cè)有明確要求;每步離心后需要充分再懸浮,保證微球的分散狀態(tài),普通振蕩或渦旋達(dá)不到需求,量少水浴超聲分散,量多要上超聲設(shè)備了,所謂破壞抗體情況多在于超聲局部溫度升高所致,優(yōu)化超聲控制,你可以控制單次超聲秒數(shù)及頻率和總時(shí)長(zhǎng),同時(shí)可以上冰。蝗绻麤](méi)有明確無(wú)需洗滌,活化前可能需要洗球,去除雜質(zhì)及多余的表面活性劑;活化時(shí)間不易過(guò)長(zhǎng);MES緩沖液適合洗滌及活化,PH不適合偶聯(lián),需要按照7.4的PH基礎(chǔ)去優(yōu)化偶聯(lián)緩沖液,但該P(yáng)H及以上條件下羧基活化中間體不穩(wěn)定,所以也就沒(méi)必要過(guò)夜,37℃搖床偶聯(lián)1小時(shí)左右即可,封閉后的微球保存液也一樣要合適,可以維持標(biāo)記物穩(wěn)定 |
新蟲(chóng) (小有名氣)
新蟲(chóng) (小有名氣)
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