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| 【有獎交流】積極回復(fù)本帖子，參與交流，就有機(jī)會分得作者 cindyyue19 的 1 個金幣 | |||
cindyyue19金蟲 (小有名氣)
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[交流]
大腸桿菌蛋白表達(dá)時用何種方法去除N端甲硫氨酸?
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| 最近想要表達(dá)蛋白，想要去掉N端的甲硫氨酸，請問哪位高手能指導(dǎo)一二? |
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2樓2020-09-22 07:08:12
pennchem
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3樓2020-09-22 08:04:34
zsygxh
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4樓2020-09-22 13:24:19
cindyyue19
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5樓2020-09-22 17:11:57
zsygxh
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小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
cindyyue19: 金幣+1 2020-10-07 09:56:36
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
cindyyue19: 金幣+1 2020-10-07 09:56:36
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我前面的表述可能有點問題。我本意是想說，如果你是在實驗室里，需要幾十到幾百mg蛋白用于實驗研究，那么直接重新構(gòu)建質(zhì)粒，在N端連上一個能完全去除的標(biāo)簽就行了，這樣簡單、方便、高效。如果你是在藥企或其它單位，需要大量生產(chǎn)這個蛋白的話，那么需要考慮產(chǎn)量的問題。比如，在菌體表達(dá)蛋白總量相當(dāng)?shù)那闆r下，融合標(biāo)簽越長，目的蛋白占總蛋白比例就越少，所以產(chǎn)量就越少，而如果你的目的蛋白分子量本身就很小，那影響會更明顯。再比如，序列發(fā)生變化，表達(dá)量也會變化，極端（且常見）情況下甚至不表達(dá)。所以如果是生產(chǎn)的情況，建議你嘗試構(gòu)建多種不同的標(biāo)簽，根據(jù)實際表達(dá)來定奪（需要考慮融合蛋白的表達(dá)總量，蛋白結(jié)構(gòu)/活性的變化，副產(chǎn)物對后續(xù)工藝的影響等等，比較麻煩）。我前面語境好像在說融合標(biāo)簽不適合生產(chǎn)，其實融合在生物制藥生產(chǎn)中是很常見的，這其實只是我表述有問題。其它能夠徹底、均一地切除fMet并且不對目的蛋白結(jié)構(gòu)造成影響的方法，目前我不太清楚。 |
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cindyyue196樓2020-09-25 16:38:59
cindyyue19
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7樓2020-10-07 09:56:45
8樓2020-10-08 22:14:02
，謝謝了！ 9樓2021-10-31 11:25:43
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