 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 2881 | 回復(fù): 8 | |||
| 【有獎(jiǎng)交流】積極回復(fù)本帖子，參與交流，就有機(jī)會(huì)分得作者 cindyyue19 的 1 個(gè)金幣 | |||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | |||
cindyyue19金蟲 (小有名氣)
|
[交流]
大腸桿菌蛋白表達(dá)時(shí)用何種方法去除N端甲硫氨酸?
|
||
| 最近想要表達(dá)蛋白，想要去掉N端的甲硫氨酸，請(qǐng)問(wèn)哪位高手能指導(dǎo)一二? |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
化學(xué)學(xué)碩求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
工科278分求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
307求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
315求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
314求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
材料301分求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
一志愿中科大材料與化工。353分能調(diào)劑到哪？
已經(jīng)有10人回復(fù)
-
285求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
290 材料與化工求調(diào)劑
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
一志愿河海大學(xué)085900土木水利專碩279求調(diào)劑不挑專業(yè)
已經(jīng)有7人回復(fù)
zsygxh
金蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 4 (幼兒園)
- 金幣: 1110.3
- 散金: 11
- 紅花: 2
- 帖子: 105
- 在線: 56.5小時(shí)
- 蟲號(hào): 2821684
- 注冊(cè): 2013-11-23
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
★ ★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
cindyyue19: 金幣+1 2020-10-07 09:56:36
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
cindyyue19: 金幣+1 2020-10-07 09:56:36
|
我前面的表述可能有點(diǎn)問(wèn)題。我本意是想說(shuō)，如果你是在實(shí)驗(yàn)室里，需要幾十到幾百mg蛋白用于實(shí)驗(yàn)研究，那么直接重新構(gòu)建質(zhì)粒，在N端連上一個(gè)能完全去除的標(biāo)簽就行了，這樣簡(jiǎn)單、方便、高效。如果你是在藥企或其它單位，需要大量生產(chǎn)這個(gè)蛋白的話，那么需要考慮產(chǎn)量的問(wèn)題。比如，在菌體表達(dá)蛋白總量相當(dāng)?shù)那闆r下，融合標(biāo)簽越長(zhǎng)，目的蛋白占總蛋白比例就越少，所以產(chǎn)量就越少，而如果你的目的蛋白分子量本身就很小，那影響會(huì)更明顯。再比如，序列發(fā)生變化，表達(dá)量也會(huì)變化，極端（且常見(jiàn)）情況下甚至不表達(dá)。所以如果是生產(chǎn)的情況，建議你嘗試構(gòu)建多種不同的標(biāo)簽，根據(jù)實(shí)際表達(dá)來(lái)定奪（需要考慮融合蛋白的表達(dá)總量，蛋白結(jié)構(gòu)/活性的變化，副產(chǎn)物對(duì)后續(xù)工藝的影響等等，比較麻煩）。我前面語(yǔ)境好像在說(shuō)融合標(biāo)簽不適合生產(chǎn)，其實(shí)融合在生物制藥生產(chǎn)中是很常見(jiàn)的，這其實(shí)只是我表述有問(wèn)題。其它能夠徹底、均一地切除fMet并且不對(duì)目的蛋白結(jié)構(gòu)造成影響的方法，目前我不太清楚。 |
cindyyue196樓2020-09-25 16:38:59
mritang
新蟲 (知名作家)
- 應(yīng)助: 2 (幼兒園)
- 金幣: 2736.7
- 散金: 7539
- 紅花: 21
- 帖子: 6160
- 在線: 471.1小時(shí)
- 蟲號(hào): 2455389
- 注冊(cè): 2013-05-09
- 性別: GG
- 專業(yè): 中獸醫(yī)學(xué)
2樓2020-09-22 07:08:12
pennchem
專家顧問(wèn) (正式寫手)
-
專家經(jīng)驗(yàn): +21 - BioEPI: 5
- 應(yīng)助: 297 (大學(xué)生)
- 金幣: 10477.5
- 散金: 65
- 紅花: 28
- 帖子: 596
- 在線: 1101小時(shí)
- 蟲號(hào): 2139205
- 注冊(cè): 2012-11-21
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
- 管轄: 生物科學(xué)
3樓2020-09-22 08:04:34
zsygxh
金蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 4 (幼兒園)
- 金幣: 1110.3
- 散金: 11
- 紅花: 2
- 帖子: 105
- 在線: 56.5小時(shí)
- 蟲號(hào): 2821684
- 注冊(cè): 2013-11-23
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
cindyyue19: 金幣+8 2020-09-22 16:58:31
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
cindyyue19: 金幣+8 2020-09-22 16:58:31
| 首位的甲酰甲硫氨酸(fMet)在胞內(nèi)能被部分切除，切除的效率受第二位氨基酸側(cè)鏈的影響較大，不同序列切割率差異比較大。如果你是想要純化一些均一的不含fMet的目的蛋白做實(shí)驗(yàn)，而不是用于大量生產(chǎn)的話，建議你在序列前面融合能完全切除的標(biāo)簽，比如在前面融合DDDDK，純化后用腸激酶切除，或者融合sumo標(biāo)簽，用ULP1切除，能得到均一的目的蛋白。 |
4樓2020-09-22 13:24:19
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 化學(xué)學(xué)碩求調(diào)劑 +3 | 努力奮斗112 2026-03-12 | 3/150 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 285求調(diào)劑 +3 | 柴郡貓_ 2026-03-12 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 085701環(huán)境工程專碩求調(diào)劑 +8 | 幼稚園大班打手 2026-03-08 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 283求調(diào)劑 +3 | 小樓。 2026-03-12 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑（085602一志愿985） +9 | 化工人999 2026-03-09 | 9/450 |
|
|
|
[考研] （081700）化學(xué)工程與技術(shù)-298分求調(diào)劑 +9 | 11啦啦啦 2026-03-11 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 0703求調(diào)劑 +6 | jtyq001 2026-03-10 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 接受26屆調(diào)劑生 +22 | 豬豬豬毛 2026-03-06 | 23/1150 |
|
|
|
[考研] 材料專碩288分求調(diào)劑 一志愿211 +3 | 在家想你 2026-03-11 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 327分求調(diào)劑086 +4 | 西紅柿?小帥 2026-03-09 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工 326 求調(diào)劑 +4 | 熱愛(ài)生活ing 2026-03-09 | 4/200 |
|
|
|
[基金申請(qǐng)] 面上項(xiàng)目還需要AI說(shuō)明嗎？ +3 | liyundong 2026-03-08 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 調(diào)劑 +3 | 13853210211 2026-03-08 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 288求調(diào)劑（0703）一志愿東北大學(xué) +5 | 好好- 2026-03-07 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +3 | 拾柒12。 2026-03-08 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料科學(xué)（0805）338 求調(diào)劑 +7 | xiaokang3286 2026-03-07 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 346分材料求調(diào)劑 +5 | snow_反季節(jié)版 2026-03-07 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 070300化學(xué)求調(diào)劑292分 +3 | 打烊eee 2026-03-07 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 誠(chéng)求調(diào)劑，323分 有專利/科研/實(shí)習(xí)經(jīng)歷 +6 | 橙子cyx 2026-03-06 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 材料與化工354調(diào)劑 +4 | Lucy-xiao 2026-03-06 | 7/350 |
|