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[交流]
枯草芽孢桿菌轉(zhuǎn)化相關(guān)疑問
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有沒有做枯草芽孢桿菌表達(dá)的老師，有幾個問題想請教各位老師 1）請問枯草芽孢桿菌轉(zhuǎn)化后過夜培養(yǎng)一般多久會長出陽性菌落？我試了加海藻糖電轉(zhuǎn)和張曉舟老師的化學(xué)轉(zhuǎn)化法，一般都要在16h之后才會長出一點點，而且菌落是很小的圓點，做菌落PCR鑒定也沒有條帶，只有一次過夜培養(yǎng)12h不到就長出大一點的圓點，白色的，但是菌落PCR還是沒有條帶。請問大家做枯草轉(zhuǎn)化一般多久有結(jié)果，菌落形態(tài)是什么樣子的，如果方便的話有圖片更好 2）請問枯草芽孢桿菌可以菌落PCR鑒定嗎？我是用白色槍頭挑取小菌落到10ul水里，95℃加熱10分鐘，再-20℃放置5分鐘，高速離心取1ul做模板。之前成功過一次，但是最近做了好幾次都沒有條帶，請問是不是PCR方法不對導(dǎo)致結(jié)果不穩(wěn)定。請問大家都是怎么鑒定的，接種液體提質(zhì)粒嗎？ 3）請問枯草芽孢桿菌轉(zhuǎn)化最后涂板取多少量，電轉(zhuǎn)我是1ml復(fù)蘇體系取100ul涂板，涂完是干凈的，但是過夜培養(yǎng)后在平板表面像是長出一層像膜一樣粗糙沙沙的東西，這種情況正常嗎 |
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xjqxzlxr(金幣+1): 謝謝參與
xjqxzlxr(金幣+1): 謝謝參與
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化轉(zhuǎn)方法挺方便的，江南大學(xué)博士論文或其他論文上有(需要加EGTA的方法)，一定要注意抗生素濃度問題，不確定可以做一個梯度，質(zhì)粒多加點，pcr用菌液比較好，菌落pcr容易假陽性，并且如果菌體多回堵瓊脂糖的泳道，導(dǎo)致條帶聚集在孔里，跑不下去 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
12樓2020-07-28 07:18:48
15樓2020-12-29 18:03:53
16樓2020-12-30 00:05:40
20樓2023-05-04 09:25:24
5樓2020-07-16 22:03:57
9樓2020-07-17 10:19:22
forhighbio 
捐助貴賓 (著名寫手)
小冀-: 屏蔽內(nèi)容, 違規(guī)存檔, 涉嫌廣告，可以提供建議或指導(dǎo) 2020-07-23 09:28:41
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本帖內(nèi)容被屏蔽 |
10樓2020-07-17 10:52:37
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請問電轉(zhuǎn)做出來了嗎？我也是假陽性21樓2023-08-12 19:29:52
22樓2024-07-12 16:17:55
簡單回復(fù)
2020-07-16 19:48
回復(fù)
xjqxzlxr(金幣+1): 謝謝參與
斕曦20193樓
2020-07-16 20:07
回復(fù)
xjqxzlxr(金幣+1): 謝謝參與
。 發(fā)自小木蟲Android客戶端
tzynew4樓
2020-07-16 21:38
回復(fù)
xjqxzlxr(金幣+1): 謝謝參與
9 發(fā)自小木蟲Android客戶端
2020-07-16 23:20
回復(fù)
xjqxzlxr(金幣+1): 謝謝參與
2020-07-17 07:40
回復(fù)
xjqxzlxr(金幣+1): 謝謝參與
u 發(fā)自小木蟲Android客戶端
6804168樓
2020-07-17 07:48
回復(fù)
xjqxzlxr(金幣+1): 謝謝參與
6 發(fā)自小木蟲IOS客戶端
miaojiabing11樓
2020-07-23 08:32
回復(fù)
xjqxzlxr(金幣+1): 謝謝參與
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