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枯草芽孢桿菌轉化相關疑問
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有沒有做枯草芽孢桿菌表達的老師,有幾個問題想請教各位老師 1)請問枯草芽孢桿菌轉化后過夜培養(yǎng)一般多久會長出陽性菌落?我試了加海藻糖電轉和張曉舟老師的化學轉化法,一般都要在16h之后才會長出一點點,而且菌落是很小的圓點,做菌落PCR鑒定也沒有條帶,只有一次過夜培養(yǎng)12h不到就長出大一點的圓點,白色的,但是菌落PCR還是沒有條帶。請問大家做枯草轉化一般多久有結果,菌落形態(tài)是什么樣子的,如果方便的話有圖片更好 2)請問枯草芽孢桿菌可以菌落PCR鑒定嗎?我是用白色槍頭挑取小菌落到10ul水里,95℃加熱10分鐘,再-20℃放置5分鐘,高速離心取1ul做模板。之前成功過一次,但是最近做了好幾次都沒有條帶,請問是不是PCR方法不對導致結果不穩(wěn)定。請問大家都是怎么鑒定的,接種液體提質粒嗎? 3)請問枯草芽孢桿菌轉化最后涂板取多少量,電轉我是1ml復蘇體系取100ul涂板,涂完是干凈的,但是過夜培養(yǎng)后在平板表面像是長出一層像膜一樣粗糙沙沙的東西,這種情況正常嗎 |
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