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枯草芽孢桿菌轉(zhuǎn)化相關(guān)疑問(wèn)
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有沒(méi)有做枯草芽孢桿菌表達(dá)的老師，有幾個(gè)問(wèn)題想請(qǐng)教各位老師 1）請(qǐng)問(wèn)枯草芽孢桿菌轉(zhuǎn)化后過(guò)夜培養(yǎng)一般多久會(huì)長(zhǎng)出陽(yáng)性菌落？我試了加海藻糖電轉(zhuǎn)和張曉舟老師的化學(xué)轉(zhuǎn)化法，一般都要在16h之后才會(huì)長(zhǎng)出一點(diǎn)點(diǎn)，而且菌落是很小的圓點(diǎn)，做菌落PCR鑒定也沒(méi)有條帶，只有一次過(guò)夜培養(yǎng)12h不到就長(zhǎng)出大一點(diǎn)的圓點(diǎn)，白色的，但是菌落PCR還是沒(méi)有條帶。請(qǐng)問(wèn)大家做枯草轉(zhuǎn)化一般多久有結(jié)果，菌落形態(tài)是什么樣子的，如果方便的話有圖片更好 2）請(qǐng)問(wèn)枯草芽孢桿菌可以菌落PCR鑒定嗎？我是用白色槍頭挑取小菌落到10ul水里，95℃加熱10分鐘，再-20℃放置5分鐘，高速離心取1ul做模板。之前成功過(guò)一次，但是最近做了好幾次都沒(méi)有條帶，請(qǐng)問(wèn)是不是PCR方法不對(duì)導(dǎo)致結(jié)果不穩(wěn)定。請(qǐng)問(wèn)大家都是怎么鑒定的，接種液體提質(zhì)粒嗎？ 3）請(qǐng)問(wèn)枯草芽孢桿菌轉(zhuǎn)化最后涂板取多少量，電轉(zhuǎn)我是1ml復(fù)蘇體系取100ul涂板，涂完是干凈的，但是過(guò)夜培養(yǎng)后在平板表面像是長(zhǎng)出一層像膜一樣粗糙沙沙的東西，這種情況正常嗎 |
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酷草芽鮑
新蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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xjqxzlxr(金幣+1): 謝謝參與
xjqxzlxr(金幣+1): 謝謝參與
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化轉(zhuǎn)方法挺方便的，江南大學(xué)博士論文或其他論文上有(需要加EGTA的方法)，一定要注意抗生素濃度問(wèn)題，不確定可以做一個(gè)梯度，質(zhì)粒多加點(diǎn)，pcr用菌液比較好，菌落pcr容易假陽(yáng)性，并且如果菌體多回堵瓊脂糖的泳道，導(dǎo)致條帶聚集在孔里，跑不下去 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
12樓2020-07-28 07:18:48
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