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枯草芽孢桿菌轉(zhuǎn)化相關(guān)疑問(wèn)
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有沒(méi)有做枯草芽孢桿菌表達(dá)的老師,有幾個(gè)問(wèn)題想請(qǐng)教各位老師 1)請(qǐng)問(wèn)枯草芽孢桿菌轉(zhuǎn)化后過(guò)夜培養(yǎng)一般多久會(huì)長(zhǎng)出陽(yáng)性菌落?我試了加海藻糖電轉(zhuǎn)和張曉舟老師的化學(xué)轉(zhuǎn)化法,一般都要在16h之后才會(huì)長(zhǎng)出一點(diǎn)點(diǎn),而且菌落是很小的圓點(diǎn),做菌落PCR鑒定也沒(méi)有條帶,只有一次過(guò)夜培養(yǎng)12h不到就長(zhǎng)出大一點(diǎn)的圓點(diǎn),白色的,但是菌落PCR還是沒(méi)有條帶。請(qǐng)問(wèn)大家做枯草轉(zhuǎn)化一般多久有結(jié)果,菌落形態(tài)是什么樣子的,如果方便的話有圖片更好 2)請(qǐng)問(wèn)枯草芽孢桿菌可以菌落PCR鑒定嗎?我是用白色槍頭挑取小菌落到10ul水里,95℃加熱10分鐘,再-20℃放置5分鐘,高速離心取1ul做模板。之前成功過(guò)一次,但是最近做了好幾次都沒(méi)有條帶,請(qǐng)問(wèn)是不是PCR方法不對(duì)導(dǎo)致結(jié)果不穩(wěn)定。請(qǐng)問(wèn)大家都是怎么鑒定的,接種液體提質(zhì)粒嗎? 3)請(qǐng)問(wèn)枯草芽孢桿菌轉(zhuǎn)化最后涂板取多少量,電轉(zhuǎn)我是1ml復(fù)蘇體系取100ul涂板,涂完是干凈的,但是過(guò)夜培養(yǎng)后在平板表面像是長(zhǎng)出一層像膜一樣粗糙沙沙的東西,這種情況正常嗎 |
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