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[求助]
如何在排除緩沖液干擾的前提下測(cè)定蛋白是否含金屬離子
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| 蛋白存在于緩沖液中（含鈉離子），用ICP法測(cè)定的是溶液總的元素含量，不能分辨離子（鈉離子）是不是來(lái)自于蛋白質(zhì)，如果用透析的辦法能完全除去緩沖液中的離子嗎，或者冷凍干燥獲得蛋白干粉會(huì)不會(huì)還帶有溶液中的離子呢？知識(shí)有限，求助大家用什么方法可以只測(cè)蛋白里面的金屬離子，謝謝各位 |
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超濾離心換液本質(zhì)上跟透析是一樣的，都是降低離子濃度。舉例來(lái)講，比如你的蛋白體積10ml，鈉離子濃度100mM,透析到1Lbuffer中，理論濃度變成1mM，再換液透析至1L buffer 中，濃度降至10uM,再換液……4次換液理論上鈉離子濃度稀釋了1億倍（實(shí)際可能達(dá)不到），含量是極低的，如果儀器的靈敏度很高，這種濃度都能檢測(cè)到的話，繼續(xù)透析，直至低于儀器可識(shí)別范圍。另外，如果蛋白結(jié)合鈉離子，那么會(huì)有一個(gè)比例，比如1分子蛋白結(jié)合1分子鈉離子，那么當(dāng)透析到一定濃度后，不管再怎么透析，鈉離子濃度幾乎不再變化，你可以比較不同透析倍數(shù)的鈉離子濃度也能判斷。不推薦超濾離心換液，因?yàn)楹芸赡苡绊懙鞍追�(wěn)定性，發(fā)生聚集。分子篩換液也是一種實(shí)驗(yàn)室規(guī)模常用的方法，脫鹽柱就是一種較粗糙的分子篩，你要求高最好使用純化用的分子篩，用長(zhǎng)度高一點(diǎn)的柱子，大分子先出，小分子很晚才出。 |
5樓2019-11-12 12:07:29
zsygxh
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| 不了解你所用的方法。想去除鈉離子，冷凍干燥肯定不行，冷凍干燥只能去除水和可揮發(fā)性成分，鈉鹽最后會(huì)析出與蛋白干粉共存。透析理論上是無(wú)法完全去除某一組分的，但通過(guò)多次換液，可以讓某一組分趨近于0（但不等于0），相當(dāng)于稀釋。雖然無(wú)法完全去除鈉離子，但仍然可以通過(guò)透析達(dá)到你的實(shí)驗(yàn)?zāi)康�。要知道即使多個(gè)蛋白分子與一個(gè)金屬離子形成配位鍵，通常蛋白分子的個(gè)數(shù)也是個(gè)位數(shù)，所以如果你溶液里面的鈉離子的摩爾濃度比蛋白的摩爾濃度低幾個(gè)數(shù)量級(jí)，那么假設(shè)是蛋白結(jié)合的鈉離子，檢測(cè)得到的鈉離子的量會(huì)遠(yuǎn)高于你透析后計(jì)算的理論量。透析盡量多換幾次液。 |
2樓2019-11-11 15:36:24
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3樓2019-11-11 15:38:22
4樓2019-11-11 19:25:42
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