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[求助]
如何在排除緩沖液干擾的前提下測定蛋白是否含金屬離子
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| 蛋白存在于緩沖液中（含鈉離子），用ICP法測定的是溶液總的元素含量，不能分辨離子（鈉離子）是不是來自于蛋白質(zhì)，如果用透析的辦法能完全除去緩沖液中的離子嗎，或者冷凍干燥獲得蛋白干粉會不會還帶有溶液中的離子呢？知識有限，求助大家用什么方法可以只測蛋白里面的金屬離子，謝謝各位 |
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zsygxh
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2樓2019-11-11 15:36:24
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3樓2019-11-11 15:38:22
4樓2019-11-11 19:25:42
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超濾離心換液本質(zhì)上跟透析是一樣的，都是降低離子濃度。舉例來講，比如你的蛋白體積10ml，鈉離子濃度100mM,透析到1Lbuffer中，理論濃度變成1mM，再換液透析至1L buffer 中，濃度降至10uM,再換液……4次換液理論上鈉離子濃度稀釋了1億倍（實際可能達不到），含量是極低的，如果儀器的靈敏度很高，這種濃度都能檢測到的話，繼續(xù)透析，直至低于儀器可識別范圍。另外，如果蛋白結合鈉離子，那么會有一個比例，比如1分子蛋白結合1分子鈉離子，那么當透析到一定濃度后，不管再怎么透析，鈉離子濃度幾乎不再變化，你可以比較不同透析倍數(shù)的鈉離子濃度也能判斷。不推薦超濾離心換液，因為很可能影響蛋白穩(wěn)定性，發(fā)生聚集。分子篩換液也是一種實驗室規(guī)模常用的方法，脫鹽柱就是一種較粗糙的分子篩，你要求高最好使用純化用的分子篩，用長度高一點的柱子，大分子先出，小分子很晚才出。 |
5樓2019-11-12 12:07:29
6樓2019-11-12 15:05:51
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