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[求助]
如何在排除緩沖液干擾的前提下測定蛋白是否含金屬離子
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| 蛋白存在于緩沖液中（含鈉離子），用ICP法測定的是溶液總的元素含量，不能分辨離子（鈉離子）是不是來自于蛋白質(zhì)，如果用透析的辦法能完全除去緩沖液中的離子嗎，或者冷凍干燥獲得蛋白干粉會不會還帶有溶液中的離子呢？知識有限，求助大家用什么方法可以只測蛋白里面的金屬離子，謝謝各位 |
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zsygxh
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3樓2019-11-11 15:38:22
zsygxh
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| 不了解你所用的方法。想去除鈉離子，冷凍干燥肯定不行，冷凍干燥只能去除水和可揮發(fā)性成分，鈉鹽最后會析出與蛋白干粉共存。透析理論上是無法完全去除某一組分的，但通過多次換液，可以讓某一組分趨近于0（但不等于0），相當(dāng)于稀釋。雖然無法完全去除鈉離子，但仍然可以通過透析達到你的實驗?zāi)康�。要知道即使多個蛋白分子與一個金屬離子形成配位鍵，通常蛋白分子的個數(shù)也是個位數(shù)，所以如果你溶液里面的鈉離子的摩爾濃度比蛋白的摩爾濃度低幾個數(shù)量級，那么假設(shè)是蛋白結(jié)合的鈉離子，檢測得到的鈉離子的量會遠高于你透析后計算的理論量。透析盡量多換幾次液。 |
2樓2019-11-11 15:36:24
4樓2019-11-11 19:25:42
zsygxh
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超濾離心換液本質(zhì)上跟透析是一樣的，都是降低離子濃度。舉例來講，比如你的蛋白體積10ml，鈉離子濃度100mM,透析到1Lbuffer中，理論濃度變成1mM，再換液透析至1L buffer 中，濃度降至10uM,再換液……4次換液理論上鈉離子濃度稀釋了1億倍（實際可能達不到），含量是極低的，如果儀器的靈敏度很高，這種濃度都能檢測到的話，繼續(xù)透析，直至低于儀器可識別范圍。另外，如果蛋白結(jié)合鈉離子，那么會有一個比例，比如1分子蛋白結(jié)合1分子鈉離子，那么當(dāng)透析到一定濃度后，不管再怎么透析，鈉離子濃度幾乎不再變化，你可以比較不同透析倍數(shù)的鈉離子濃度也能判斷。不推薦超濾離心換液，因為很可能影響蛋白穩(wěn)定性，發(fā)生聚集。分子篩換液也是一種實驗室規(guī)模常用的方法，脫鹽柱就是一種較粗糙的分子篩，你要求高最好使用純化用的分子篩，用長度高一點的柱子，大分子先出，小分子很晚才出。 |
5樓2019-11-12 12:07:29
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