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楊錫369新蟲 (小有名氣)
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重組質(zhì)粒導(dǎo)入農(nóng)桿菌，菌落PCR假陽性該怎么處理 已有1人參與
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我把重組好的質(zhì)粒從大腸桿菌DH5α中抽提出來（重組質(zhì)粒測(cè)序鑒定目的基因已經(jīng)放進(jìn)去了的），然后把抽提的質(zhì)粒導(dǎo)入農(nóng)桿菌感受態(tài)，在kan50抗性平板上28℃培養(yǎng)兩天，挑單菌落做菌落PCR，怎么都P不出來。 請(qǐng)問各位小木蟲遇到這種情況該怎么處理？怎么才能提升陽性率，降低假陽性？@gyesang |
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13樓2019-05-18 13:26:41
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你的抗生素用錯(cuò)了。你用的抗生素應(yīng)該是農(nóng)桿菌加重組載體的抗性，而不只是重組載體的抗性 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
楊錫3692樓2019-05-16 13:05:11
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3樓2019-05-16 13:08:20
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4樓2019-05-16 13:13:01
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雙抗可以用來檢測(cè)重組載體是否導(dǎo)入進(jìn)農(nóng)桿菌，單抗的即使沒有轉(zhuǎn)入也可以存活，雙抗跟加保險(xiǎn) 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
5樓2019-05-16 13:56:56
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6樓2019-05-16 13:59:23
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7樓2019-05-16 14:12:10
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農(nóng)桿菌GV 3101的抗性是利福平，還有其他的農(nóng)桿菌，我沒用過不確定，你在用的時(shí)候可以搜索一下它對(duì)應(yīng)的抗性 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
8樓2019-05-16 22:56:38
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1.建議涂板50ug/ml Kan+50ug/ml Rif(GV3101 EHA105 AHL1 LBA4404，其它農(nóng)桿菌按說明書添加) 單獨(dú)的Kan 會(huì)長(zhǎng)少量雜菌（我們的經(jīng)驗(yàn)全涂<10個(gè)斑），如果你的板子長(zhǎng)了接近1000個(gè)，肯定是轉(zhuǎn)進(jìn)去了 2.農(nóng)桿菌菌落PCR不容易做，可以嘗試質(zhì)粒小提10ml菌液再做PCR 或者做35個(gè)循環(huán)，選用好的PCRMIX |
9樓2019-05-17 10:25:16
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10樓2019-05-17 18:33:46
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