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楊錫369新蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
重組質(zhì)粒導(dǎo)入農(nóng)桿菌,菌落PCR假陽(yáng)性該怎么處理 已有1人參與
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我把重組好的質(zhì)粒從大腸桿菌DH5α中抽提出來(lái)(重組質(zhì)粒測(cè)序鑒定目的基因已經(jīng)放進(jìn)去了的),然后把抽提的質(zhì)粒導(dǎo)入農(nóng)桿菌感受態(tài),在kan50抗性平板上28℃培養(yǎng)兩天,挑單菌落做菌落PCR,怎么都P不出來(lái)。 請(qǐng)問(wèn)各位小木蟲(chóng)遇到這種情況該怎么處理?怎么才能提升陽(yáng)性率,降低假陽(yáng)性?@gyesang |
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1.建議涂板50ug/ml Kan+50ug/ml Rif(GV3101 EHA105 AHL1 LBA4404,其它農(nóng)桿菌按說(shuō)明書添加) 單獨(dú)的Kan 會(huì)長(zhǎng)少量雜菌(我們的經(jīng)驗(yàn)全涂<10個(gè)斑),如果你的板子長(zhǎng)了接近1000個(gè),肯定是轉(zhuǎn)進(jìn)去了 2.農(nóng)桿菌菌落PCR不容易做,可以嘗試質(zhì)粒小提10ml菌液再做PCR 或者做35個(gè)循環(huán),選用好的PCRMIX |
新蟲(chóng) (小有名氣)
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你的抗生素用錯(cuò)了。你用的抗生素應(yīng)該是農(nóng)桿菌加重組載體的抗性,而不只是重組載體的抗性 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
新蟲(chóng) (小有名氣)
新蟲(chóng) (小有名氣)
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