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Western blot 轉(zhuǎn)膜使用甲醇問題求教 已有2人參與
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Western blot轉(zhuǎn)膜液里為什么要加20%甲醇？？我搜索并得到以下解釋，但不確定是否正確： 1、甲醇可以可以減少電流，從而降低產(chǎn)熱。 疑問：直接設置更低的轉(zhuǎn)膜電壓不就可以了，何必加甲醇。 2、甲醇可以去除蛋白上的SDS 疑問：SDS去除了如何保證蛋白向正極移動。 3、不加甲醇蛋白轉(zhuǎn)不上膜 疑問：這個說法的原理是什么？我曾用過購買的10× 轉(zhuǎn)膜液， 直接用水稀釋即可使用，蛋白完全能順利轉(zhuǎn)上膜，之后也blot出了條帶。 |
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我找到了其他課題組也用乙醇代替的回答。 我覺得降低電導防止過熱沒有必要用甲醇，畢竟太毒了，不劃算，開始使就用冰的buffer，設置更小的電壓就行了。 也有人表示轉(zhuǎn)膜不用甲醇是可以的（活化的時候還是要的）。加了甲醇有利于蛋白分子更好的結(jié)合到膜上，等等。以下連接給你參考： https://www.researchgate.net/pos ... the_transfer_buffer |
6樓2019-04-12 19:37:02
lirol
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【答案】應助回帖
感謝參與，應助指數(shù) +1
| （從別處粘來的，覺得這個解釋更合理些，由于甲醇有一定的毒性，我們是用的乙醇，使用效果也不錯。）PVDF膜一定要在純甲醇里浸潤的！不然蛋白結(jié)合不上去。在100%甲醇里短暫浸潤,其目的是為了活化PVDF膜上面的正電基團，使它更容易跟帶負電的蛋白質(zhì)結(jié)合。小分子及大分子量的蛋白轉(zhuǎn)移時，多加或不加甲醇也是這個目的。因為小分子不容易和膜結(jié)合而大分子更容易。轉(zhuǎn)膜的過程，是一個恒定電場下，電荷轉(zhuǎn)移的過程。這個過程中，蛋白的轉(zhuǎn)移和電場強度以及自身電荷有關。你加入的甲醇主要是降低電導的作用。防止你的溶液過熱。 |
2樓2019-04-12 08:44:57
匿名
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3樓2019-04-12 08:54:57
4樓2019-04-12 15:46:32
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