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一個(gè)不小心就金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[求助]
Western blot 轉(zhuǎn)膜使用甲醇問(wèn)題求教 已有2人參與
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Western blot轉(zhuǎn)膜液里為什么要加20%甲醇？？我搜索并得到以下解釋，但不確定是否正確： 1、甲醇可以可以減少電流，從而降低產(chǎn)熱。 疑問(wèn)：直接設(shè)置更低的轉(zhuǎn)膜電壓不就可以了，何必加甲醇。 2、甲醇可以去除蛋白上的SDS 疑問(wèn)：SDS去除了如何保證蛋白向正極移動(dòng)。 3、不加甲醇蛋白轉(zhuǎn)不上膜 疑問(wèn)：這個(gè)說(shuō)法的原理是什么？我曾用過(guò)購(gòu)買的10× 轉(zhuǎn)膜液， 直接用水稀釋即可使用，蛋白完全能順利轉(zhuǎn)上膜，之后也blot出了條帶。 |
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3樓2019-04-12 08:54:57
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
| （從別處粘來(lái)的，覺(jué)得這個(gè)解釋更合理些，由于甲醇有一定的毒性，我們是用的乙醇，使用效果也不錯(cuò)。）PVDF膜一定要在純甲醇里浸潤(rùn)的！不然蛋白結(jié)合不上去。在100%甲醇里短暫浸潤(rùn),其目的是為了活化PVDF膜上面的正電基團(tuán)，使它更容易跟帶負(fù)電的蛋白質(zhì)結(jié)合。小分子及大分子量的蛋白轉(zhuǎn)移時(shí)，多加或不加甲醇也是這個(gè)目的。因?yàn)樾》肿硬蝗菀缀湍そY(jié)合而大分子更容易。轉(zhuǎn)膜的過(guò)程，是一個(gè)恒定電場(chǎng)下，電荷轉(zhuǎn)移的過(guò)程。這個(gè)過(guò)程中，蛋白的轉(zhuǎn)移和電場(chǎng)強(qiáng)度以及自身電荷有關(guān)。你加入的甲醇主要是降低電導(dǎo)的作用。防止你的溶液過(guò)熱。 |
2樓2019-04-12 08:44:57
一個(gè)不小心就
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4樓2019-04-12 15:46:32
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5樓2019-04-12 16:02:45
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