 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 3488 | 回復(fù): 5 | ||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點擊這里查看本話題的所有回帖 | ||
tq0ax1r新蟲 (初入文壇)
|
[求助]
蛋白不掛鎳柱，關(guān)于變性上柱的問題 已有1人參與
|
|
|
蛋白n端有6histag + mbp, 現(xiàn)在用鎳柱純化，發(fā)現(xiàn)蛋白幾乎全在flow through里。（大家可能要問我為什么不用amylose resin既然有mbp的話。我的蛋白是個膜蛋白，雖然mbp提高了溶解性，目前還加著去垢劑，無法確定去垢劑是否會影響amylose binding。并且用該柱純化后需要透析，在這過程中會透析掉去垢劑，不確定這樣蛋白會不會沉淀。）所以目前是先計劃變性后再上鎳柱，這個蛋白里cystein相當(dāng)多，也就是說二硫鍵多，當(dāng)然也會形成多聚體，我的問題是在變性上柱的buffer里加了8m尿素，還要不要加個5mm 巰基乙醇（這點是否夠）？查看了別人的做法是上柱前加巰基乙醇，洗柱子的buffer里不加，最后洗脫液里再加巰基乙醇，不知道這最后一步是不是為了蛋白在被洗脫下來的過程中不形成多聚體？我是希望在柱上復(fù)性的，所以洗脫液里不打算加尿素。不知道洗脫液里能不能不加巰基乙醇？不加會怎樣？請大家給點建議！多謝了！ (質(zhì)粒測序正確，表達(dá)后跑過sdspage已看到表達(dá)的蛋白條帶。沒加目標(biāo)蛋白前，空載體能表達(dá)6histag-MBP, 并且能在鎳柱上純化出來MBP。為什么在它C端加了目標(biāo)蛋白后就掛不上柱子了呢？是因為目標(biāo)蛋白使得形成了多聚體或包涵體嗎？) |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗中的趣事：實驗器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗中的趣事：和實驗材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有131人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計，解析生命機制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
tq0ax1r
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 50
- 帖子: 31
- 在線: 3.7小時
- 蟲號: 2015501
- 注冊: 2012-09-20
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
3樓2019-03-23 09:48:19
panbenxun
木蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 3 (幼兒園)
- 金幣: 2032.4
- 帖子: 99
- 在線: 38.6小時
- 蟲號: 2081577
- 注冊: 2012-10-23
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
2樓2019-03-22 18:50:27
zrf519
銅蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 17.7
- 帖子: 86
- 在線: 97.9小時
- 蟲號: 2759094
- 注冊: 2013-10-28
- 性別: MM
- 專業(yè): 神經(jīng)生物學(xué)
4樓2019-04-11 15:19:47
|
可能是蛋白形成聚集體造成空間位阻，可嘗試XL系列有延伸臂或者專門做大分子的填料。因為是膜蛋白，可能是因為疏水作用較強，形成了膠束，我之前做的一個膜蛋白，是在蛋白液里面加終濃度0.5%的SDS才能掛柱的，你可以嘗試一下，不過要考慮去垢劑的去除問題，祝你早日成功！ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
5樓2019-05-11 20:22:53
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 歡迎211本科同學(xué)，過A區(qū)國家線，A區(qū)非偏遠(yuǎn)一本，交叉學(xué)科課題組 +21 | lisimayy 2026-03-04 | 33/1650 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 334求調(diào)劑 +8 | Trying] 2026-03-06 | 8/400 |
|
|
|
[考研]
 化學(xué)工程與技術(shù)316求調(diào)劑
+7
|
Sixuan wang 2026-03-06 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 08工科 +4 | li李樂成 2026-03-06 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 化學(xué)290求調(diào)劑 +3 | 兩顆 西柚 2026-03-07 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料調(diào)劑 +10 | ounce. 2026-03-04 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 一志愿中石油，化學(xué)工程，301求調(diào)劑 +4 | 豚饅枳枳 2026-03-04 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料專碩290求調(diào)劑 +8 | 杰尼龜aaa 2026-03-04 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 0703 東華大學(xué) 理學(xué)化學(xué)均過 a 線，總分 281 求調(diào)劑 +6 | 香香 Lu 2026-03-03 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 考研282分求調(diào)劑，接受跨專業(yè) +4 | 劉淄博 2026-03-04 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 材料調(diào)劑 +5 | ws 上岸鴨 2026-03-05 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 271求調(diào)劑 +7 | 月色c 2026-03-05 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 283求調(diào)劑 +10 | 鹿沫笙 2026-03-02 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 267調(diào)劑求助 +5 | 聰少OZ 2026-03-04 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 281電子信息求調(diào)劑 +5 | jhtfeybgj 2026-03-02 | 9/450 |
|
|
|
[基金申請] 沒有青基直接申請面上，感覺自己瘋了 +6 | kevin63t 2026-03-02 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 295求調(diào)劑 +6 | 等春來， 2026-03-04 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 312求調(diào)劑 +8 | 醋精華了一下發(fā)?/a> 2026-03-03 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 0703 總分319求調(diào)劑 +4 | Xinyuu 2026-03-02 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 理學(xué)，工學(xué)，農(nóng)學(xué)調(diào)劑，少走彎路，這里歡迎您！ +8 | likeihood 2026-03-02 | 11/550 |
|