 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 6 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 3483 | 回復(fù): 5 | ||
tq0ax1r新蟲 (初入文壇)
|
[求助]
蛋白不掛鎳柱，關(guān)于變性上柱的問題 已有1人參與
|
|
蛋白n端有6histag + mbp, 現(xiàn)在用鎳柱純化，發(fā)現(xiàn)蛋白幾乎全在flow through里。（大家可能要問我為什么不用amylose resin既然有mbp的話。我的蛋白是個膜蛋白，雖然mbp提高了溶解性，目前還加著去垢劑，無法確定去垢劑是否會影響amylose binding。并且用該柱純化后需要透析，在這過程中會透析掉去垢劑，不確定這樣蛋白會不會沉淀。）所以目前是先計劃變性后再上鎳柱，這個蛋白里cystein相當(dāng)多，也就是說二硫鍵多，當(dāng)然也會形成多聚體，我的問題是在變性上柱的buffer里加了8m尿素，還要不要加個5mm 巰基乙醇（這點是否夠）？查看了別人的做法是上柱前加巰基乙醇，洗柱子的buffer里不加，最后洗脫液里再加巰基乙醇，不知道這最后一步是不是為了蛋白在被洗脫下來的過程中不形成多聚體？我是希望在柱上復(fù)性的，所以洗脫液里不打算加尿素。不知道洗脫液里能不能不加巰基乙醇？不加會怎樣？請大家給點建議！多謝了！ (質(zhì)粒測序正確，表達后跑過sdspage已看到表達的蛋白條帶。沒加目標(biāo)蛋白前，空載體能表達6histag-MBP, 并且能在鎳柱上純化出來MBP。為什么在它C端加了目標(biāo)蛋白后就掛不上柱子了呢？是因為目標(biāo)蛋白使得形成了多聚體或包涵體嗎？) |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗中的趣事：實驗器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗中的趣事：和實驗材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有211人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計，解析生命機制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
panbenxun
木蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 3 (幼兒園)
- 金幣: 2032.4
- 帖子: 99
- 在線: 38.6小時
- 蟲號: 2081577
- 注冊: 2012-10-23
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
2樓2019-03-22 18:50:27
tq0ax1r
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 50
- 帖子: 31
- 在線: 3.7小時
- 蟲號: 2015501
- 注冊: 2012-09-20
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
3樓2019-03-23 09:48:19
zrf519
銅蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 17.7
- 帖子: 86
- 在線: 97.9小時
- 蟲號: 2759094
- 注冊: 2013-10-28
- 性別: MM
- 專業(yè): 神經(jīng)生物學(xué)
4樓2019-04-11 15:19:47
|
可能是蛋白形成聚集體造成空間位阻，可嘗試XL系列有延伸臂或者專門做大分子的填料。因為是膜蛋白，可能是因為疏水作用較強，形成了膠束，我之前做的一個膜蛋白，是在蛋白液里面加終濃度0.5%的SDS才能掛柱的，你可以嘗試一下，不過要考慮去垢劑的去除問題，祝你早日成功！ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
5樓2019-05-11 20:22:53
yubeihong
鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)
- 應(yīng)助: 20 (小學(xué)生)
- 金幣: 7537.3
- 散金: 605
- 紅花: 40
- 帖子: 3051
- 在線: 641小時
- 蟲號: 253258
- 注冊: 2006-05-20
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物化工與食品化工
6樓2019-09-20 18:26:26
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 tq0ax1r 的主題更新
| 6 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)材料與化工281求調(diào)劑，有科研和獲獎經(jīng)歷 +11 | wsxw 2026-03-02 | 12/600 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 267調(diào)劑求助 +5 | 聰少OZ 2026-03-04 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 281電子信息求調(diào)劑 +5 | jhtfeybgj 2026-03-02 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工 298 調(diào)劑 +9 | 小西笑嘻嘻 2026-03-03 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 一志愿鄭州大學(xué)，學(xué)碩，物理化學(xué)， 333求調(diào)劑 +5 | 李魔女斗篷 2026-03-04 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 295求調(diào)劑 +6 | 等春來， 2026-03-04 | 6/300 |
|
|
[考研] 085601 材料工程 320 +6 | 和樂瑤 2026-03-03 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 本科太原理工采礦工程，求調(diào)劑 +3 | onlx 2026-03-01 | 3/150 |
|
|
|
[考博] 26申博-目前4篇SCI一作 +3 | chen_2024 2026-03-02 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 298求調(diào)劑一志愿中海洋 +3 | lour. 2026-03-03 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)306調(diào)劑 +4 | 26要上岸 2026-03-03 | 4/200 |
|
|
|
[基金申請] 請問大家，研究風(fēng)險與應(yīng)對措施那里， 大家都怎么寫呢 ？ +3 | cauasen 2026-03-02 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 289求調(diào)劑 +7 | BrightLL 2026-03-02 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 材料學(xué)碩318求調(diào)劑 +11 | February_Feb 2026-03-01 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 261求調(diào)劑 +3 | 陸lh 2026-03-01 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 275求調(diào)劑 +7 | 明遠(yuǎn)求學(xué) 2026-03-01 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 295求調(diào)劑 +8 | 19171856320 2026-02-28 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 材料調(diào)劑 +6 | 愛擦汗的可樂冰 2026-02-28 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 279求調(diào)劑 +3 | dua1 2026-03-01 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 307求調(diào)劑 +4 | 73372112 2026-02-28 | 6/300 |
|