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wjny新蟲 (小有名氣)
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[交流]
如何保證接入發(fā)酵培養(yǎng)基的接種量一致
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新人在進行發(fā)酵提產(chǎn)的實驗，遇到了一些問題，來問問各位大佬。 1.在從斜面往液體培養(yǎng)基接種時，如何保證不同的菌株的接種量一致呢，因為要比較不同菌株的差異，如果不能保證接種量相同不就沒什么可比性嗎？個人感覺使用接種環(huán)直接挑的誤差太大了，但是也想不到什么好方法（菌株本身帶有菌絲）。 2.目前標(biāo)準(zhǔn)品溶解在dmso中，可以直接拿這個溶液去跑hplc嗎？如果可以要不要做一個純dmso的對照，如果不可以的話那有什么別的方法嗎？ 希望各位大佬多多指教  |
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1. 直接從斜面挑菌接種似乎不太能夠定量。我的建議是從斜面挑菌后接入一個小體積的培養(yǎng)液里，培養(yǎng)一段時間富集菌體，然后測od600或者其他你這個菌種特定的濃度檢測波長下的吸光值來定量細胞數(shù)。然后按等細胞數(shù)計算各種子液的體積，接種進大體積的培養(yǎng)液里發(fā)酵培養(yǎng)。 2. 不是很清楚這個意思“可以直接拿這個溶液去跑dmso嗎?” 如果是用樣品處理細胞后觀察細胞生理性質(zhì)的改變，空白對照（dmso）是需要的；如果是用作層析分離的標(biāo)準(zhǔn)對照，空白dmso沒有必要。 |
2樓2024-05-21 03:59:54
wjny
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感謝回答。不過由于我的表述不清可能帶來了一些問題。 1.這種菌有較長的菌絲并且會互相聚集在一起，無法直接計數(shù)，而且我個人覺得這種聚集狀態(tài)可能會影響OD的測量。OD和細胞數(shù)一般肯定是正相關(guān)的，但是具體的比例關(guān)系要怎么量化我還是是沒什么頭緒。不過我也感覺按照液體積接種比較好定量，我的想法是在小的培養(yǎng)液中培養(yǎng)后離心稱干重，然后根據(jù)干重加入等比例的水，這樣保證每個里面菌的密度是一致的，然后再接入種子培養(yǎng)基，不知道這樣可不可行。 2.我當(dāng)時老眼昏花寫錯了  ，是跑HPLC，因為標(biāo)準(zhǔn)品溶解在dmso里，我的發(fā)酵液則不是，二者都要跑HPLC的，我就在想，dmso會不會對這個結(jié)果有影響。最后，不知道大佬現(xiàn)在是在國內(nèi)還是國外，要是在國內(nèi)的話注意身體啊，少熬大夜啊。 |
3樓2024-05-21 19:59:28
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wjny: 金幣+5 2024-05-22 18:52:41
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wjny: 金幣+5 2024-05-22 18:52:41
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1. 采用稱量細胞重量的方式也是一種常見的手段。如果要采用稱量法，盡量把細胞富集到一個比較高的濃度，把細胞的重量占比提高以后能夠減小因為離心后取不凈的上清液帶來的質(zhì)量上的誤差。至于稱量后加水調(diào)節(jié)細胞濃度，如果體積不大，是可以的。不過我建議不如加新鮮的種子培養(yǎng)液來調(diào)節(jié)，這樣就不會給體系帶來改變。 2. 了解了。如果你是打算直接把離心后回收的發(fā)酵液上HPLC的柱子，我建議把你的標(biāo)準(zhǔn)品用新鮮的發(fā)酵用培養(yǎng)液進行一個大比例的稀釋，得到一個DMSO的體積可以忽略的在新鮮培養(yǎng)液里的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。如果標(biāo)準(zhǔn)品濃度不夠進行大比例稀釋，我個人認(rèn)為DMSO僅作為樣品的溶劑不會對HPLC的結(jié)果造成影響。因為上柱后的樣品都是使用同樣的A，B液進行洗脫。 我在國外呢，有時差，  不熬夜 |
4樓2024-05-22 02:11:49
wjny
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5樓2024-05-22 19:03:29
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