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wjny新蟲 (小有名氣)
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[交流]
如何保證接入發(fā)酵培養(yǎng)基的接種量一致
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新人在進(jìn)行發(fā)酵提產(chǎn)的實(shí)驗(yàn)，遇到了一些問題，來問問各位大佬。 1.在從斜面往液體培養(yǎng)基接種時(shí)，如何保證不同的菌株的接種量一致呢，因?yàn)橐容^不同菌株的差異，如果不能保證接種量相同不就沒什么可比性嗎？個(gè)人感覺使用接種環(huán)直接挑的誤差太大了，但是也想不到什么好方法（菌株本身帶有菌絲）。 2.目前標(biāo)準(zhǔn)品溶解在dmso中，可以直接拿這個(gè)溶液去跑hplc嗎？如果可以要不要做一個(gè)純dmso的對照，如果不可以的話那有什么別的方法嗎？ 希望各位大佬多多指教  |
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1. 直接從斜面挑菌接種似乎不太能夠定量。我的建議是從斜面挑菌后接入一個(gè)小體積的培養(yǎng)液里，培養(yǎng)一段時(shí)間富集菌體，然后測od600或者其他你這個(gè)菌種特定的濃度檢測波長下的吸光值來定量細(xì)胞數(shù)。然后按等細(xì)胞數(shù)計(jì)算各種子液的體積，接種進(jìn)大體積的培養(yǎng)液里發(fā)酵培養(yǎng)。 2. 不是很清楚這個(gè)意思“可以直接拿這個(gè)溶液去跑dmso嗎?” 如果是用樣品處理細(xì)胞后觀察細(xì)胞生理性質(zhì)的改變，空白對照（dmso）是需要的；如果是用作層析分離的標(biāo)準(zhǔn)對照，空白dmso沒有必要。 |
2樓2024-05-21 03:59:54
wjny
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感謝回答。不過由于我的表述不清可能帶來了一些問題。 1.這種菌有較長的菌絲并且會互相聚集在一起，無法直接計(jì)數(shù)，而且我個(gè)人覺得這種聚集狀態(tài)可能會影響OD的測量。OD和細(xì)胞數(shù)一般肯定是正相關(guān)的，但是具體的比例關(guān)系要怎么量化我還是是沒什么頭緒。不過我也感覺按照液體積接種比較好定量，我的想法是在小的培養(yǎng)液中培養(yǎng)后離心稱干重，然后根據(jù)干重加入等比例的水，這樣保證每個(gè)里面菌的密度是一致的，然后再接入種子培養(yǎng)基，不知道這樣可不可行。 2.我當(dāng)時(shí)老眼昏花寫錯(cuò)了  ，是跑HPLC，因?yàn)闃?biāo)準(zhǔn)品溶解在dmso里，我的發(fā)酵液則不是，二者都要跑HPLC的，我就在想，dmso會不會對這個(gè)結(jié)果有影響。最后，不知道大佬現(xiàn)在是在國內(nèi)還是國外，要是在國內(nèi)的話注意身體啊，少熬大夜啊。 |
3樓2024-05-21 19:59:28
★ ★ ★ ★ ★ ★
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wjny: 金幣+5 2024-05-22 18:52:41
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1. 采用稱量細(xì)胞重量的方式也是一種常見的手段。如果要采用稱量法，盡量把細(xì)胞富集到一個(gè)比較高的濃度，把細(xì)胞的重量占比提高以后能夠減小因?yàn)殡x心后取不凈的上清液帶來的質(zhì)量上的誤差。至于稱量后加水調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度，如果體積不大，是可以的。不過我建議不如加新鮮的種子培養(yǎng)液來調(diào)節(jié)，這樣就不會給體系帶來改變。 2. 了解了。如果你是打算直接把離心后回收的發(fā)酵液上HPLC的柱子，我建議把你的標(biāo)準(zhǔn)品用新鮮的發(fā)酵用培養(yǎng)液進(jìn)行一個(gè)大比例的稀釋，得到一個(gè)DMSO的體積可以忽略的在新鮮培養(yǎng)液里的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。如果標(biāo)準(zhǔn)品濃度不夠進(jìn)行大比例稀釋，我個(gè)人認(rèn)為DMSO僅作為樣品的溶劑不會對HPLC的結(jié)果造成影響。因?yàn)樯现蟮臉悠范际鞘褂猛瑯拥腁，B液進(jìn)行洗脫。 我在國外呢，有時(shí)差，  不熬夜 |
4樓2024-05-22 02:11:49
wjny
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5樓2024-05-22 19:03:29
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