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蛋白斷裂或者降解會(huì)影響蛋白的濃度么？ 已有2人參與
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如題，各位大神，蛋白濃縮完成后用Bradford進(jìn)行定量。根據(jù)定量結(jié)果取2ug跑膠，但是跑膠出來(lái)的條帶大概有三四條，都在目標(biāo)分子量處，且條帶都很細(xì)，跟2ug的BSA條帶對(duì)比，感覺(jué)目標(biāo)泳道的條帶細(xì)且淺，但是是多條的。 但，之前的純化圖的泳道中只有一條較粗的目的條帶。 以上是背景，現(xiàn)在懷疑是不是定量偏高，導(dǎo)致定量后跑的條帶情況要弱？ 第二點(diǎn)，定量后跑膠條帶出現(xiàn)了多條，懷疑蛋白是不是斷裂或者降解了，若是的話，斷裂或者降解后的蛋白濃度會(huì)發(fā)生變化么？（這個(gè)問(wèn)題是我比較想知道的  ）跪求各位大神的指點(diǎn)  |
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盜我QQ者必下地?/a>
禁蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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4樓2025-08-20 11:48:02
fuyuandj86
版主 (著名寫(xiě)手)
己所不欲，勿施于人
- BioEPI: 1
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- 專(zhuān)業(yè): 生物化學(xué)
- 管轄: 生物科學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
我要睡覺(jué): 金幣+10, ★★★很有幫助 2022-09-21 15:48:11
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
我要睡覺(jué): 金幣+10, ★★★很有幫助 2022-09-21 15:48:11
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這個(gè)問(wèn)題要分兩個(gè)方面來(lái)說(shuō)，一個(gè)是蛋白降解會(huì)不會(huì)影響蛋白的實(shí)際濃度；另一個(gè)是蛋白降解會(huì)不會(huì)影響濃度的測(cè)量。 蛋白降解或者斷裂了當(dāng)然會(huì)影響目的蛋白的濃度。如果你說(shuō)的蛋白指的是總蛋白濃度的話，末端一些片段的被切割不會(huì)影響摩爾濃度，但會(huì)影響質(zhì)量濃度(mg/ml)。 至于一個(gè)蛋白變成兩段或多段以后和斷裂前，測(cè)量的表觀濃度有沒(méi)有差別，這取決于測(cè)量方法。如果斷裂不是很?chē)?yán)重，測(cè)量的總蛋白表觀濃度不會(huì)有明顯差別。如果嚴(yán)重?cái)嗔�，一般�?lái)說(shuō)用BCA和Bradford法測(cè)得的總蛋白表觀濃度會(huì)小一些，用UV280測(cè)得的表觀濃度不變。 |
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
2樓2022-09-21 14:50:09
送紅花一朵 |
感覺(jué)大神的回復(fù)，有學(xué)習(xí)到。 還有個(gè)問(wèn)題也想請(qǐng)教下：Bradford定量完成后，根據(jù)濃度會(huì)取2ug的蛋白來(lái)跑SDS-PAGE，同時(shí)會(huì)有2ug的BSA作為對(duì)照。但是有時(shí)候會(huì)有一些蛋白的跑出口的條帶粗細(xì)大小跟BSA相差甚遠(yuǎn)(基本只有目的蛋白條帶，不存在其他雜蛋白)，開(kāi)始會(huì)懷疑是定量偏高導(dǎo)致的，重新定量后再跑條帶情況也是差不多的，這種現(xiàn)象真的有點(diǎn)想不通哇。 |
3樓2022-09-21 15:37:16
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