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蛋白斷裂或者降解會(huì)影響蛋白的濃度么? 已有2人參與
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如題,各位大神,蛋白濃縮完成后用Bradford進(jìn)行定量。根據(jù)定量結(jié)果取2ug跑膠,但是跑膠出來的條帶大概有三四條,都在目標(biāo)分子量處,且條帶都很細(xì),跟2ug的BSA條帶對(duì)比,感覺目標(biāo)泳道的條帶細(xì)且淺,但是是多條的。 但,之前的純化圖的泳道中只有一條較粗的目的條帶。 以上是背景,現(xiàn)在懷疑是不是定量偏高,導(dǎo)致定量后跑的條帶情況要弱? 第二點(diǎn),定量后跑膠條帶出現(xiàn)了多條,懷疑蛋白是不是斷裂或者降解了,若是的話,斷裂或者降解后的蛋白濃度會(huì)發(fā)生變化么?(這個(gè)問題是我比較想知道的 )跪求各位大神的指點(diǎn) |
版主 (著名寫手)
己所不欲,勿施于人
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這個(gè)問題要分兩個(gè)方面來說,一個(gè)是蛋白降解會(huì)不會(huì)影響蛋白的實(shí)際濃度;另一個(gè)是蛋白降解會(huì)不會(huì)影響濃度的測(cè)量。 蛋白降解或者斷裂了當(dāng)然會(huì)影響目的蛋白的濃度。如果你說的蛋白指的是總蛋白濃度的話,末端一些片段的被切割不會(huì)影響摩爾濃度,但會(huì)影響質(zhì)量濃度(mg/ml)。 至于一個(gè)蛋白變成兩段或多段以后和斷裂前,測(cè)量的表觀濃度有沒有差別,這取決于測(cè)量方法。如果斷裂不是很嚴(yán)重,測(cè)量的總蛋白表觀濃度不會(huì)有明顯差別。如果嚴(yán)重?cái)嗔,一般來說用BCA和Bradford法測(cè)得的總蛋白表觀濃度會(huì)小一些,用UV280測(cè)得的表觀濃度不變。 |

禁蟲 (正式寫手)
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