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susu1014新蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
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[交流]
透明質(zhì)酸抑制率實(shí)驗(yàn)樣品組和空白對(duì)照都顯色?
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實(shí)驗(yàn)方法:采用 Elson-Morgan 改良法測(cè)定一系列濃度(1-4mg/mL)的樣品與透明質(zhì)酸酶的作用,1、2 號(hào)試管( 0.5 mL 樣品溶液和 0.5 mL 濃度 600 U/mL 透明質(zhì)酸酶) ,3、4 號(hào)試管( 0.5 mL 蒸餾水和 0.5 mL 醋酸緩沖液) ,37 ℃保溫 20 min;加入 0.1 mL ( 2.5 mol/L) 氯化鈣溶液, 37 ℃保溫 20 min;1、3 號(hào)試管中加入 0.5 mL 0.5 mg/mL 的透明質(zhì)酸鈉,2、 4 號(hào)試管中加入 0.5 mL 醋酸緩沖液,37 ℃保 溫 40 min;室溫放置 10 min,加入 0.5 mL 乙酰丙酮溶液( 3.5 mL 乙酰丙酮溶于 50 mL 0.1 ml/L 碳酸鈉溶液中)、0.1 mL NaOH 溶液( 5 mol/L) 和 0.5 mL 蒸餾水,放入沸水浴中 15 min;冷卻 5 min,放入冰水浴 10 min;室溫放置 10 min,加入 1 mL P-DAB 顯色劑( 0.8g DBMA 與 15mL 濃 HCl 以及無(wú)水乙醇混合均勻);充分振蕩后,加入無(wú)水乙醇3.5 mL,室溫放置 30 min,顯色,取150μL置96孔板放入酶標(biāo)儀在 530 nm 處測(cè)定 1、2、3、4 號(hào)四支試管的吸光度 A1、A2、A3、A4。按下式計(jì)算透明質(zhì)酸酶的抑制率: 透明質(zhì)酸酶抑制率= ) [1− (A1- A2)/(A3- A4 )]×100% 問(wèn)題是計(jì)算出來(lái)的抑制率超過(guò)100%和有些是負(fù)的,放入沸水浴后樣品和空白都顯示是棕紅色,配的顯色劑是淺綠色,不知道是什么原因,有咩有做過(guò)的大神指導(dǎo)指導(dǎo)? |
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