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[交流]
透明質(zhì)酸抑制率實驗樣品組和空白對照都顯色？
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實驗方法：采用 Elson-Morgan 改良法測定一系列濃度（1-4mg/mL）的樣品與透明質(zhì)酸酶的作用，1、2 號試管( 0.5 mL 樣品溶液和 0.5 mL 濃度 600 U/mL 透明質(zhì)酸酶) ，3、4 號試管( 0.5 mL 蒸餾水和 0.5 mL 醋酸緩沖液) ，37 ℃保溫 20 min；加入 0.1 mL ( 2.5 mol/L) 氯化鈣溶液， 37 ℃保溫 20 min；1、3 號試管中加入 0.5 mL 0.5 mg/mL 的透明質(zhì)酸鈉，2、 4 號試管中加入 0.5 mL 醋酸緩沖液，37 ℃保 溫 40 min；室溫放置 10 min，加入 0.5 mL 乙酰丙酮溶液( 3.5 mL 乙酰丙酮溶于 50 mL 0.1 ml/L 碳酸鈉溶液中)、0.1 mL NaOH 溶液( 5 mol/L) 和 0.5 mL 蒸餾水，放入沸水浴中 15 min；冷卻 5 min，放入冰水浴 10 min;室溫放置 10 min，加入 1 mL P-DAB 顯色劑( 0.8g DBMA 與 15mL 濃 HCl 以及無水乙醇混合均勻)；充分振蕩后，加入無水乙醇3.5 mL，室溫放置 30 min，顯色，取150μL置96孔板放入酶標(biāo)儀在 530 nm 處測定 1、2、3、4 號四支試管的吸光度 A1、A2、A3、A4。按下式計算透明質(zhì)酸酶的抑制率： 透明質(zhì)酸酶抑制率= ) [1− （A1- A2）/(A3- A4 )]×100% 問題是計算出來的抑制率超過100%和有些是負(fù)的，放入沸水浴后樣品和空白都顯示是棕紅色，配的顯色劑是淺綠色，不知道是什么原因，有咩有做過的大神指導(dǎo)指導(dǎo)啊？ |
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chenhuanlong
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XG-WUST20樓
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