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[交流]
透明質酸抑制率實驗樣品組和空白對照都顯色?
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實驗方法:采用 Elson-Morgan 改良法測定一系列濃度(1-4mg/mL)的樣品與透明質酸酶的作用,1、2 號試管( 0.5 mL 樣品溶液和 0.5 mL 濃度 600 U/mL 透明質酸酶) ,3、4 號試管( 0.5 mL 蒸餾水和 0.5 mL 醋酸緩沖液) ,37 ℃保溫 20 min;加入 0.1 mL ( 2.5 mol/L) 氯化鈣溶液, 37 ℃保溫 20 min;1、3 號試管中加入 0.5 mL 0.5 mg/mL 的透明質酸鈉,2、 4 號試管中加入 0.5 mL 醋酸緩沖液,37 ℃保 溫 40 min;室溫放置 10 min,加入 0.5 mL 乙酰丙酮溶液( 3.5 mL 乙酰丙酮溶于 50 mL 0.1 ml/L 碳酸鈉溶液中)、0.1 mL NaOH 溶液( 5 mol/L) 和 0.5 mL 蒸餾水,放入沸水浴中 15 min;冷卻 5 min,放入冰水浴 10 min;室溫放置 10 min,加入 1 mL P-DAB 顯色劑( 0.8g DBMA 與 15mL 濃 HCl 以及無水乙醇混合均勻);充分振蕩后,加入無水乙醇3.5 mL,室溫放置 30 min,顯色,取150μL置96孔板放入酶標儀在 530 nm 處測定 1、2、3、4 號四支試管的吸光度 A1、A2、A3、A4。按下式計算透明質酸酶的抑制率: 透明質酸酶抑制率= ) [1− (A1- A2)/(A3- A4 )]×100% 問題是計算出來的抑制率超過100%和有些是負的,放入沸水浴后樣品和空白都顯示是棕紅色,配的顯色劑是淺綠色,不知道是什么原因,有咩有做過的大神指導指導。 |
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剛錄用,沒有期刊號,但是在線可看的論文可以放為代表作嗎
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