 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 2031 | 回復(fù): 5 | ||
| 【懸賞金幣】回答本帖問(wèn)題，作者gxmpcc將贈(zèng)送您 10 個(gè)金幣 | ||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | ||
gxmpcc新蟲(chóng) (初入文壇)
|
[求助]
被DEAE FF折磨吐了 已有1人參與
|
|
|
請(qǐng)教各位前輩，我目前要純化一種蛋白，無(wú)標(biāo)簽，約60KD，PI5.1 實(shí)驗(yàn)步驟如下： 樣品處理： 1.組織溶于等體積標(biāo)準(zhǔn)鹽溶液（含100mM Kcl）樣品洗滌超聲離心棄上清取沉淀，重復(fù)3次 2.沉淀復(fù)懸于5倍體積提取液（含500mmNacl）超聲離心棄上清取沉淀，重復(fù)2次 3.沉淀復(fù)懸于Buffer A（10mM 磷酸二氫鈉），超聲后過(guò)濾膜得上柱樣品 柱子為DEAE FF 1ml 平衡和洗脫緩Buffer均為磷酸二氫鈉（含8M尿素），分別為10mM和1000mM,PH均為7.0 上柱前曾用BufferA(10mM)平衡20個(gè)柱體積至基線平穩(wěn)，上樣量為10ml 洗脫方式為梯度濃度洗脫，以2ml/min，10ml一管收集；梯度濃度設(shè)置如下 NO 時(shí)間 A% B% 1 0 100 0 2 30 90 10 3 90 85 15 4 150 80 20 5 240 60 40 6 300 50 50 7 360 30 70 8 390 0 100 因?qū)嶒?yàn)室沒(méi)有電導(dǎo)儀，所以沒(méi)有測(cè)過(guò)電導(dǎo) 出現(xiàn)的問(wèn)題： 按梯度濃度收集80管樣品，總是在第一管出現(xiàn)目的蛋白和一些雜蛋白，后續(xù)管里無(wú)任何蛋白。嘗試過(guò)改變PH為6.5，7.5，8.0，結(jié)果依然如此。請(qǐng)教各位前輩這是沒(méi)掛上柱子嗎？在不換柱子得情況下有哪些可以改進(jìn)的地方？ |
回復(fù)此樓» 本帖@通知
» 猜你喜歡
085600材料與化工 292分 求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
接受26屆調(diào)劑生
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
273求調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
A區(qū)一本交叉課題組，低分調(diào)劑，招收機(jī)械電子信息通信等交叉方向
已經(jīng)有45人回復(fù)
-
334求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
求調(diào)劑推薦
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
一志愿211，0860總分286食品工程專業(yè)求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
招調(diào)劑
已經(jīng)有14人回復(fù)
-
誠(chéng)求調(diào)劑，323分 有專利/科研/實(shí)習(xí)經(jīng)歷
已經(jīng)有6人回復(fù)
1234568a
新蟲(chóng) (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 23.8
- 帖子: 19
- 在線: 10.1小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 25979352
- 注冊(cè): 2021-03-22
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
5樓2023-03-05 09:25:13
snoopyzxx
木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
- BioEPI: 4
- 應(yīng)助: 49 (小學(xué)生)
- 金幣: 3232.6
- 散金: 1266
- 紅花: 43
- 帖子: 2256
- 在線: 276.6小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 548497
- 注冊(cè): 2008-04-19
- 性別: MM
- 專業(yè): 全球變化生態(tài)學(xué)
|
既然你溶解樣品沒(méi)用尿素，你的純化緩沖為啥要用尿素？變性后的等電點(diǎn)和理論等電點(diǎn)是不一樣的。 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
2樓2021-07-16 09:19:24
gxmpcc
新蟲(chóng) (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 34
- 帖子: 2
- 在線: 9.1小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 26193581
- 注冊(cè): 2021-04-13
- 專業(yè): 抗炎與免疫藥物藥理
3樓2021-07-16 15:03:26
walking dead
金蟲(chóng) (小有名氣)
填料制備和蛋白純化專家
- 應(yīng)助: 40 (小學(xué)生)
- 貴賓: 0.001
- 金幣: 1354.8
- 散金: 59
- 紅花: 17
- 帖子: 287
- 在線: 56.5小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 4175016
- 注冊(cè): 2015-10-26
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物化學(xué)
4樓2021-08-03 10:34:35
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 一志愿南京大學(xué)資源與環(huán)境專業(yè)283分求調(diào)劑 +6 | 追云?? 2026-03-04 | 6/300 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考博] 售瀆SCI文章，我:8⊙ 55 1⊙ 54。備注【⊙=0】 +3 | ipys00zm58 2026-03-05 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 085701環(huán)境工程295求調(diào)劑，一志愿A區(qū)211 +6 | 等春來(lái)， 2026-03-06 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 0703 東華大學(xué) 理學(xué)化學(xué)均過(guò) a 線，總分 281 求調(diào)劑 +6 | 香香 Lu 2026-03-03 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 化學(xué) 0703求調(diào)劑 總分293 一志愿211 +9 | 土土小蟲(chóng) 2026-03-03 | 11/550 |
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +7 | 曼殊2266 2026-02-28 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 267化工調(diào)劑求助 +5 | 聰少OZ 2026-03-04 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 292求調(diào)劑 +9 | yhk_819 2026-02-28 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 本科太原理工采礦工程，求調(diào)劑 +3 | onlx 2026-03-01 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 能動(dòng)297求調(diào)劑，本科川大 +4 | 邵11 2026-03-04 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 331求調(diào)劑 +3 | zzZ&zZ 2026-03-03 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 298求調(diào)劑一志愿中海洋 +3 | lour. 2026-03-03 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 化學(xué)0703求調(diào)劑 學(xué)碩 理/工科均可 總分279 +3 | 1一11 2026-03-03 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 261求調(diào)劑 +3 | 陸lh 2026-03-01 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿華南理工大學(xué)材料與化工326分，求調(diào)劑 +3 | wujinrui1 2026-02-28 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 322求調(diào)劑 +3 | 熊境喆 2026-03-01 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 化工299分求調(diào)劑 一志愿985落榜 +5 | 嘻嘻(*^ω^*) 2026-03-01 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 328求調(diào)劑 +3 | aaadim 2026-03-01 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 調(diào)劑 +3 | 簡(jiǎn)木ChuFront 2026-02-28 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 317一志愿華南理工電氣工程求調(diào)劑 +6 | Soliloquy_Q 2026-02-28 | 11/550 |
|