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野山椒鐵蟲 (小有名氣)
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[交流]
用于釀酒酵母的pRS425質(zhì)粒
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| 看不懂這個質(zhì)粒是什么意思,上面的啟動子都是用于原核的啟動子,怎么在釀酒酵母中使用。坑袥]有大佬幫忙解答一下 |

鐵蟲 (小有名氣)

木蟲 (正式寫手)
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這個質(zhì)粒上自帶了三個基因,一個是ampr,另一個是leu2,還有一個是laczα。 其中ampr和laczα各自帶一個原核啟動子,leu2自帶一個酵母內(nèi)的啟動子。 而這三個啟動子都是為了行使質(zhì)粒的正常功能構(gòu)建的啟動子,不能用來表達(dá)你的基因。 ampr的原核啟動子用于表達(dá)氨芐抗性基因,因為質(zhì)粒在構(gòu)建完成后第一步要轉(zhuǎn)入大腸擴(kuò)增,ampr作為一個篩選標(biāo)記。 leu2基因確保leu營養(yǎng)缺陷型的酵母可以在不含leu的平板上生長,是作為酵母轉(zhuǎn)入質(zhì)粒的篩選標(biāo)記。 laczα中包含一個mcs位點,可以用于整合你的目的基因,整合后lacz基因被破壞,可以用于大腸的藍(lán)白斑篩選。 三個基因都要求啟動子和序列的完整,質(zhì)粒才能正常行使功能。 而你如果要引入基因,通常是需要插入到mcs位點,這個目標(biāo)基因是需要自帶啟動子和終止子的。也就是說你要整合上質(zhì)粒的基因的結(jié)構(gòu)是:promoter-orf-terminator的完整結(jié)構(gòu)。 質(zhì)粒本身沒有提供給你表達(dá)目標(biāo)基因的啟動子。 不知道我有沒有回答你的問題。希望我表達(dá)清楚了。 |
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