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野山椒鐵蟲 (小有名氣)
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[交流]
用于釀酒酵母的pRS425質(zhì)粒
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| 看不懂這個質(zhì)粒是什么意思，上面的啟動子都是用于原核的啟動子，怎么在釀酒酵母中使用��？有沒有大佬幫忙解答一下 |
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野山椒: 金幣+5, 謝謝 2021-03-18 10:56:48
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野山椒: 金幣+5, 謝謝 2021-03-18 10:56:48
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這個質(zhì)粒上自帶了三個基因，一個是ampr，另一個是leu2，還有一個是laczα。 其中ampr和laczα各自帶一個原核啟動子，leu2自帶一個酵母內(nèi)的啟動子。 而這三個啟動子都是為了行使質(zhì)粒的正常功能構(gòu)建的啟動子，不能用來表達你的基因。 ampr的原核啟動子用于表達氨芐抗性基因，因為質(zhì)粒在構(gòu)建完成后第一步要轉(zhuǎn)入大腸擴增，ampr作為一個篩選標記。 leu2基因確保leu營養(yǎng)缺陷型的酵母可以在不含leu的平板上生長，是作為酵母轉(zhuǎn)入質(zhì)粒的篩選標記。 laczα中包含一個mcs位點，可以用于整合你的目的基因，整合后lacz基因被破壞，可以用于大腸的藍白斑篩選。 三個基因都要求啟動子和序列的完整，質(zhì)粒才能正常行使功能。 而你如果要引入基因，通常是需要插入到mcs位點，這個目標基因是需要自帶啟動子和終止子的。也就是說你要整合上質(zhì)粒的基因的結(jié)構(gòu)是：promoter-orf-terminator的完整結(jié)構(gòu)。 質(zhì)粒本身沒有提供給你表達目標基因的啟動子。 不知道我有沒有回答你的問題。希望我表達清楚了。 |
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野山椒2樓2021-01-06 20:51:41
野山椒
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3樓2021-03-18 11:04:46
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