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| 【有獎(jiǎng)交流】積極回復(fù)本帖子，參與交流，就有機(jī)會(huì)分得作者 野山椒 的 15 個(gè)金幣 | |||
野山椒鐵蟲(chóng) (小有名氣)
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[交流]
用于釀酒酵母的pRS425質(zhì)粒
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| 看不懂這個(gè)質(zhì)粒是什么意思，上面的啟動(dòng)子都是用于原核的啟動(dòng)子，怎么在釀酒酵母中使用�。坑袥](méi)有大佬幫忙解答一下 |
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小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
野山椒: 金幣+5, 謝謝 2021-03-18 10:56:48
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
野山椒: 金幣+5, 謝謝 2021-03-18 10:56:48
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這個(gè)質(zhì)粒上自帶了三個(gè)基因，一個(gè)是ampr，另一個(gè)是leu2，還有一個(gè)是laczα。 其中ampr和laczα各自帶一個(gè)原核啟動(dòng)子，leu2自帶一個(gè)酵母內(nèi)的啟動(dòng)子。 而這三個(gè)啟動(dòng)子都是為了行使質(zhì)粒的正常功能構(gòu)建的啟動(dòng)子，不能用來(lái)表達(dá)你的基因。 ampr的原核啟動(dòng)子用于表達(dá)氨芐抗性基因，因?yàn)橘|(zhì)粒在構(gòu)建完成后第一步要轉(zhuǎn)入大腸擴(kuò)增，ampr作為一個(gè)篩選標(biāo)記。 leu2基因確保leu營(yíng)養(yǎng)缺陷型的酵母可以在不含leu的平板上生長(zhǎng)，是作為酵母轉(zhuǎn)入質(zhì)粒的篩選標(biāo)記。 laczα中包含一個(gè)mcs位點(diǎn)，可以用于整合你的目的基因，整合后lacz基因被破壞，可以用于大腸的藍(lán)白斑篩選。 三個(gè)基因都要求啟動(dòng)子和序列的完整，質(zhì)粒才能正常行使功能。 而你如果要引入基因，通常是需要插入到mcs位點(diǎn)，這個(gè)目標(biāo)基因是需要自帶啟動(dòng)子和終止子的。也就是說(shuō)你要整合上質(zhì)粒的基因的結(jié)構(gòu)是：promoter-orf-terminator的完整結(jié)構(gòu)。 質(zhì)粒本身沒(méi)有提供給你表達(dá)目標(biāo)基因的啟動(dòng)子。 不知道我有沒(méi)有回答你的問(wèn)題。希望我表達(dá)清楚了。 |
野山椒2樓2021-01-06 20:51:41
野山椒
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3樓2021-03-18 11:04:46
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