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茯苓鴨新蟲 (初入文壇)
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[求助]
α-葡萄糖苷酶抑制活性實驗 已有1人參與
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一、目前在體系優(yōu)化，遇到的問題是：未出現(xiàn)平臺期，每次實驗所得數(shù)據(jù)有一定差距，曲線趨勢不統(tǒng)一，無法確定最適酶濃度和底物蔗糖濃度，希望有前輩能提些建議。 二、實驗用的方法是： ①0.1M的PBS 70ul和20ul酶混合預(yù)熱10min,（空白組為不加酶，其他條件皆一致） ②加入20ul蔗糖反應(yīng)30min， ③加入100ul的0.2M的碳酸鈉終止，（以上反應(yīng)在1.5ml的離心管內(nèi)完成，與在酶標(biāo)板內(nèi)反應(yīng)所得數(shù)據(jù)對比而言，前者反應(yīng)更充分） ④取50ul反應(yīng)液，往其中加入150ul葡萄糖工作液，再反應(yīng)15min后酶標(biāo)儀測OD。 三、但在體系優(yōu)化這個環(huán)節(jié)就出現(xiàn)了問題，我參考文獻(xiàn)，選取1.0U/ml的酶，加入不同濃度蔗糖（10、20、40、60、80、100、120、140、160mmol/l）但沒有平臺期，蔗糖60與80這邊較平，但160的OD又很高。之后又重復(fù)了好幾次，但是曲線規(guī)律不統(tǒng)一，仍然無法確定最適蔗糖濃度，但文獻(xiàn)里又做出來了，不清楚我到底漏了什么細(xì)節(jié)，希望做過類似實驗的前輩能指導(dǎo)一下。（ps先前我增加過終止液的濃度后，發(fā)現(xiàn)有平臺期，但是測出來的數(shù)據(jù)太小了，意義不大。) @lifeliuyan 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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5樓2020-12-25 08:24:37
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