 |
 |
 |
| 24小時熱門版塊排行榜 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1315 | 回復(fù): 7 | |||
| 【有獎交流】積極回復(fù)本帖子，參與交流，就有機(jī)會分得作者 飛不動D鳥 的 5 個金幣 ，回帖就立即獲得 1 個金幣，每人有 1 次機(jī)會 | |||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | |||
[交流]
質(zhì)粒pYES2轉(zhuǎn)化酵母沒有轉(zhuǎn)化子出現(xiàn)
|
|||
|
各位前輩： 我最近在做酵母的轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)，用到兩個質(zhì)粒一個是cas9質(zhì)粒一個是pYES2質(zhì)粒，用醋酸鋰轉(zhuǎn)化法，具體方法如下： 1. 挑取單克隆酵母BY4741于10 ml YPD培養(yǎng)基中，30℃，250 rpm過夜培養(yǎng)。 2. 測定過夜培養(yǎng)之后的OD600，轉(zhuǎn)接于50 ml YPD培養(yǎng)基中，使初始OD600=0.4，細(xì)胞數(shù)目約為5×106 。繼續(xù)培養(yǎng)2-4 h，使OD600=1.3-1.5，細(xì)胞個數(shù)約為2×107。 3. 用50 ml 離心管，2500 rpm，5 min 離心，收集菌體，在40 ml 1×TE懸浮。 4. 2500 rpm，5 min 離心，去上清，收集菌體重懸于2 ml 1×LiAc/0.5 TE 中。 5. 在室溫下靜置10 min。 6. 然后依次加入1 μg的質(zhì)粒，100 μl的酵母懸液，700 μl 1×LiAc/40%PEG3350/1×TE，劇烈振蕩1 min 。在30℃情況下孵育30 min。 7. 加入88 μl DMSO，混勻，在42℃下熱激7min（或20 min-25 min） 8. 2500 rpm ，5 min 離心，去除上清，在200 μl 1× TE中重懸。 9. 涂布于選擇培養(yǎng)基含有G418的培養(yǎng)基（G418濃度：200 μg/ml） 10. 將平板在30 ℃培養(yǎng)2-3天。 可是連著做了幾次了平板上都沒有轉(zhuǎn)化子出現(xiàn)，想問下大家問題出在哪里了，或者有什么可以改進(jìn)的地方嗎. |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
26申博自薦
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
進(jìn)入個人成果庫好難，一下午都沒進(jìn)去
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
接受26屆調(diào)劑生
已經(jīng)有12人回復(fù)
-
求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
求調(diào)劑 一志愿蘇州大學(xué)，0856化工323分 | 本科應(yīng)化 | 有專利/競賽/科研助手經(jīng)歷 |
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
308求調(diào)劑
已經(jīng)有9人回復(fù)
-
303求調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
085600材料與化工 292分 求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
一志愿中石油，化學(xué)工程，301求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
» 搶金幣啦！回帖就可以得到:
-
北京信息科技大學(xué)智能機(jī)器人技術(shù)方向，聯(lián)合清華培養(yǎng)碩生、博生，并長期招博士后
+1/85
-
南京大學(xué)-廣州大學(xué)招聘博士后 歡迎廣大優(yōu)秀人才�。�！
+1/82
-
湖北大學(xué)生科院邢瓊老師課題組招碩士/博士（導(dǎo)師人好！空間充裕！補(bǔ)貼到位！）
+1/81
-
海南大學(xué)吳道雄&邱天宇老師團(tuán)隊(duì)招收博士生與招聘博士后
+5/70
-
長江大學(xué)武漢校區(qū)石油工程學(xué)院人才招聘-2026
+1/41
-
美國密蘇里大學(xué)“柔性電子”課題組誠聘博士和博士后
+1/26
-
申請取消論壇的歸檔操作
+1/20
-
【實(shí)戰(zhàn)型】【生物醫(yī)藥】2026青島大學(xué)招博士生 含少數(shù)民族骨干計劃2名�。�！
+1/16
-
徐工-環(huán)境工程學(xué)院-招收調(diào)劑碩士
+1/9
-
生態(tài)遙感方向招收科研助理
+1/8
-
中科院深圳先進(jìn)技術(shù)研究院-寧波諾丁漢大學(xué)2026年聯(lián)合培養(yǎng)博士研究生招生
+1/6
-
國家青年教授武漢大學(xué)侯紹聰課題組擬招收新型光電磁材料和器件方向博士生
+1/5
-
26屆計算機(jī)、電子信息類、電科、控制、通信考研T j信息pp駿：74+08+76+6+20？
+1/4
-
尋合作：應(yīng)力腐蝕多尺度模擬
+1/3
-
#南方科技大學(xué)# 仿生醫(yī)藥與材料實(shí)驗(yàn)室 招高分子方向博士生、科研助理
+1/3
-
德國伊爾梅瑙工業(yè)大學(xué)（TU Ilmenau）柔性電子方向 誠邀CSC申請
+1/3
-
徐工-環(huán)境工程學(xué)院-招收調(diào)劑碩士
+1/2
-
清華大學(xué)深圳國際研究生院張旻課題組招收2027級博士生_機(jī)械、儀器方向
+1/1
-
青島科技大學(xué)高分子學(xué)院老師招收碩士生2名
+1/1
-
中科院深圳先進(jìn)院與寧波諾丁漢大學(xué)招收聯(lián)培博士生
+1/1
7樓2020-09-17 10:24:00
3樓2020-09-12 00:08:04
8樓2021-12-23 06:51:58
簡單回復(fù)
斕曦20194樓
2020-09-12 06:25
回復(fù)
飛不動D鳥(金幣+1): 謝謝參與
。 發(fā)自小木蟲Android客戶端
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 306求調(diào)劑 +7 | Bahati 2026-03-05 | 7/350 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 求調(diào)劑推薦 +3 | 微辣不吃 2026-03-06 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿南京大學(xué)資源與環(huán)境專業(yè)283分求調(diào)劑 +6 | 追云?? 2026-03-04 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 070300調(diào)劑一志愿南京大學(xué)化學(xué)專業(yè)，初試273分，有論文有專利有競賽，求調(diào)劑B區(qū)211 +3 | 82206202 2026-02-28 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 新疆大學(xué)地質(zhì)與礦業(yè)工程學(xué)院招生 +8 | another12 2026-03-04 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工 298 調(diào)劑 +10 | 小西笑嘻嘻 2026-03-03 | 10/500 |
|
|
|
[考研]
 材料工程調(diào)劑
+6
|
zbcm_zbcm 2026-03-05 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +3 | 52hz~~ 2026-03-05 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿蘇大材料工程專碩293求調(diào)劑 +3 | 鋼鐵大炮 2026-03-04 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 歡迎采礦、地質(zhì)、巖土、計算機(jī)、人工智能等專業(yè)的同學(xué)報考 +10 | pin8023 2026-02-28 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 334求調(diào)劑 +3 | Trying] 2026-03-03 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 紡織、生物、化學(xué)、材料等專業(yè) +3 | Eember. 2026-03-05 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +3 | 曼殊2266 2026-03-04 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 成績276，專業(yè)代碼0856求調(diào)劑 +10 | 小陳朵 2026-03-03 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)306調(diào)劑 +4 | 26要上岸 2026-03-03 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 26考研報考西工大材料308分求調(diào)劑 +4 | weizhong123 2026-03-01 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 291 求調(diào)劑 +3 | 化工2026屆畢業(yè)?/a> 2026-03-02 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 哈工大計算機(jī)劉劼團(tuán)隊(duì)招生 +4 | hit_aiot 2026-03-01 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 調(diào)劑 +3 | 簡木ChuFront 2026-02-28 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 317一志愿華南理工電氣工程求調(diào)劑 +6 | Soliloquy_Q 2026-02-28 | 11/550 |
|