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2339773049新蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
pET質(zhì)粒 已有2人參與
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請(qǐng)教一下 有兩個(gè)pET32a+重組質(zhì)粒，其中一個(gè)人為更換抗生素標(biāo)簽，這兩個(gè)質(zhì)粒在大腸中可以共存嗎？容易丟失嗎？ 謝謝 |
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2樓2020-08-15 10:07:17
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3樓2020-08-15 19:52:12
4樓2020-08-19 15:00:09
zsygxh
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理論上不同復(fù)制子可以共存，實(shí)際以不同抗性施壓也可以正常表達(dá)，我以前實(shí)驗(yàn)室有人經(jīng)常這么干。但凡有一個(gè)質(zhì)粒丟失，就失去了相應(yīng)抗性，細(xì)菌就會(huì)死亡，所以保證抗生素夠量就能保證含雙質(zhì)粒菌體一直擴(kuò)增下去并表達(dá)蛋白。需要注意的是，如果是發(fā)酵罐高密度表達(dá)，Amp等β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素會(huì)被逐漸消耗，相同復(fù)制子的質(zhì)粒在細(xì)菌擴(kuò)增傳代過(guò)程中就可能會(huì)出現(xiàn)逐漸丟失的情況，所以不宜使用，可以使用其它抗性代替。搖瓶低密度表達(dá)不存在這個(gè)問(wèn)題。 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
5樓2020-08-20 14:10:01
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