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[交流]
蛋白誘導(dǎo)表達 已有4人參與
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蛋白上清一直沒有表達，換了各種條件，還是不行 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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4樓2020-07-31 10:40:01
apple870502
木蟲 (小有名氣)
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- 專業(yè): 微生物遺傳育種學(xué)
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你的問題表達不清，無法確認你是否真的“換了各種條件”，幾個建議： 1、請確認你是否可以成功誘導(dǎo)該蛋白的表達？全菌液中是否有相應(yīng)條帶？ 如確認可表達，需要做幾個嘗試，總之目的是讓蛋白表達夠慢，這樣才不至于因表達過快而進入包涵體： 1、降低誘導(dǎo)溫度，可16度過夜表達； 2、降低IPTG濃度，減半或減至更少，如降一個數(shù)量級； 3、若以上都試過不行，換表達菌株； 4、若表達菌株也換過不行，只能換載體了，這樣就等于重頭開始，比較麻煩； 5、如果實在從上清中得不到，也不想換載體重頭開始，可以嘗試從包涵體中純化目的蛋白。 |
2樓2020-07-29 11:32:48
雨獨步
鐵桿木蟲 (著名寫手)
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3樓2020-07-29 13:04:44
5樓2020-07-31 10:42:34
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