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眼淚成詩(shī)新蟲(chóng) (初入文壇)
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[交流]
蛋白誘導(dǎo)表達(dá) 已有4人參與
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蛋白上清一直沒(méi)有表達(dá)，換了各種條件，還是不行 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
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3樓2020-07-29 13:04:44
apple870502
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小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
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你的問(wèn)題表達(dá)不清，無(wú)法確認(rèn)你是否真的“換了各種條件”，幾個(gè)建議： 1、請(qǐng)確認(rèn)你是否可以成功誘導(dǎo)該蛋白的表達(dá)？全菌液中是否有相應(yīng)條帶？ 如確認(rèn)可表達(dá)，需要做幾個(gè)嘗試，總之目的是讓蛋白表達(dá)夠慢，這樣才不至于因表達(dá)過(guò)快而進(jìn)入包涵體： 1、降低誘導(dǎo)溫度，可16度過(guò)夜表達(dá)； 2、降低IPTG濃度，減半或減至更少，如降一個(gè)數(shù)量級(jí)； 3、若以上都試過(guò)不行，換表達(dá)菌株； 4、若表達(dá)菌株也換過(guò)不行，只能換載體了，這樣就等于重頭開(kāi)始，比較麻煩； 5、如果實(shí)在從上清中得不到，也不想換載體重頭開(kāi)始，可以嘗試從包涵體中純化目的蛋白。 |
2樓2020-07-29 11:32:48
眼淚成詩(shī)
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4樓2020-07-31 10:40:01
眼淚成詩(shī)
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載體嘗試過(guò)pet-32a和28a，也16度誘導(dǎo)過(guò).iptg濃度最低嘗試過(guò)0.01mM，還是不行 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
5樓2020-07-31 10:42:34
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