 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1311 | 回復: 3 | ||
| 當前只顯示滿足指定條件的回帖，點擊這里查看本話題的所有回帖 | ||
lyq123456新蟲 (正式寫手)
|
[求助]
求助有關異二聚體蛋白構建純化問題 已有2人參與
|
|
|
我想純化一個細胞因子的兩個受體亞基的異二聚體蛋白，但是不清楚是不是用linker連接就可以？或者用多長的linker才不會影響兩個受體蛋白的表達和正常折疊？有前輩有比較好的構建純化這種異二聚體的經驗和方法嗎？求賜教！��！ 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
回復此樓» 猜你喜歡
伙伴們，祝我生日快樂吧
已經有5人回復
-
274求調劑0856材料化工
已經有10人回復
-
337一志愿華南理工0805材料求調劑
已經有6人回復
-
（081700）化學工程與技術-298分求調劑
已經有7人回復
-
材料與化工304求B區(qū)調劑
已經有5人回復
-
NSFC申報書里申請人簡歷中代表性論著還需要在申報書最后的附件里面再上傳一遍嗎
已經有9人回復
-
一志愿北京化工大學材料與化工296分求調劑
已經有17人回復
-
0703化學一志愿211 總分320求調劑
已經有3人回復
-
0703求調劑
已經有6人回復
-
一志愿天津大學材料與化工275求調劑
已經有22人回復
liudayeye
木蟲 (正式寫手)
- 應助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 3863.5
- 散金: 66
- 紅花: 1
- 帖子: 720
- 在線: 68.2小時
- 蟲號: 4126793
- 注冊: 2015-10-08
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物化學
4樓2021-07-21 12:04:34
2樓2020-05-30 19:56:17
zsygxh
金蟲 (小有名氣)
- 應助: 4 (幼兒園)
- 金幣: 1110.3
- 散金: 11
- 紅花: 2
- 帖子: 105
- 在線: 56.5小時
- 蟲號: 2821684
- 注冊: 2013-11-23
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物大分子結構與功能
【答案】應助回帖
|
沒有同時表達過異源二聚體，說說個人的想法 首先用linker連接是不行的，因為這樣表達出來就是一個蛋白而不是兩個亞基了，肯定影響折疊。 想到的方法： 1. 質粒共轉化：將兩個亞基分別連入兩個不同的質粒，共同轉化表達，注意選用雙抗性進行篩選 2. 多順反子表達：在同一個質粒的啟動子-終止子之間插入兩個亞基的基因，并各自帶RBS、起始密碼子和終止密碼子，這樣轉錄出一條mRNA，在這條mRNA上有兩個RBS，分別結合核糖體翻譯兩個蛋白。這個可以自己構建，也有商業(yè)化載體pETDuet。 3. 分別表達純化兩個蛋白，獲得各自的單體，體外優(yōu)化條件進行孵育，有相互作用，亞基結合，再用分子篩分離純化去除沒結合的單體。若表達純化的單體不穩(wěn)定，可以分別用尿素或鹽酸胍加還原劑進行變性處理，再按等摩爾比混合，之后嘗試復性，再純化分離出正確折疊的二聚體。 |
3樓2020-06-12 16:53:17
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 一志愿華科071000生物學 338求調劑 +4 | 九月九里 2026-03-05 | 4/200 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 308求調劑 +4 | 是Lupa啊 2026-03-11 | 4/200 |
|
|
[考研] 求調劑 +5 | yfihxh 2026-03-09 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 341求調劑 +3 | 搗蛋豬豬 2026-03-11 | 3/150 |
|
|
|
[碩博家園] 深圳大學碩士招生（2026秋，傳感器方向，僅錄取第一志愿） +4 | xujiaoszu 2026-03-11 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 一志愿河海大學085900土木水利專碩279求調劑不挑專業(yè) +3 | SunWwWwWw 2026-03-10 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 313分生物學求調劑 +5 | Yyt楊1 2026-03-09 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 08工科 +5 | li李樂成 2026-03-06 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 327分求調劑086 +4 | 西紅柿?小帥 2026-03-09 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 材料與化工，291，求調劑 +12 | 咕嚕咕嚕123123 2026-03-05 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 研究生招生 +3 | 徐海濤11 2026-03-10 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 化工284求調劑 +12 | 小黑想變白 2026-03-07 | 12/600 |
|
|
|
[基金申請] 面上項目還需要AI說明嗎？ +3 | liyundong 2026-03-08 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 313求調劑 +4 | Yyt楊1 2026-03-07 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 求0856調劑 +5 | 小力氣珂珂 2026-03-08 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 070300化學求調劑292分 +3 | 打烊eee 2026-03-07 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿211 085600 280數(shù)二英二求調劑 +3 | 月山斜 2026-03-06 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料專碩323求調劑 +5 | 李白26 2026-03-07 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料與化工354調劑 +4 | Lucy-xiao 2026-03-06 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 化工282求調劑一志愿211 +5 | NA0912 2026-03-05 | 6/300 |
|