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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 生物科學 » 切片相關 » 免疫組化
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heshiqing168金蟲 (著名寫手)
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[求助]
免疫組化 已有3人參與
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請問免疫組化細胞核沒有染色，是什么原因？ @gyesang @gyesang @hc-material 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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4樓2020-05-11 08:52:33
aonilsm
銀蟲 (小有名氣)
- 應助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 229.5
- 帖子: 57
- 在線: 5小時
- 蟲號: 12702412
- 注冊: 2018-11-15
- 性別: GG
- 專業(yè): 腦、脊髓、周圍神經(jīng)損傷及
2樓2020-05-08 14:40:51
【答案】應助回帖
感謝參與，應助指數(shù) +1
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蘇木素-伊紅染色（hematoxylin and eosin,HE）： 基本步驟 一、石蠟切片蘇木素一伊紅染色法的基本步驟： 脫蠟 �。�1）二甲苯I 15分鐘 �。�2）二甲苯II（應完全透明） 10分鐘 逐級降濃度酒精水化 �。�3）無水酒精I（變?yōu)椴煌该鳎?1－2分鐘 （4）無水酒精II 1－2分鐘 �。�5）95% 酒精 1－2分鐘 （6）80% 酒精 1－2分鐘 �。�7）自來水洗 片刻 染色 （8）蒸餾水 片刻 �。�9）蘇木素液染核 10—15分鐘 （10）自來水洗 片刻 �。�11）1%鹽酸酒精分化 0.5—1分鐘 �。�12）流水沖洗 片刻至數(shù)小時 �。�13）碳酸鋰飽和水溶液反藍 1分鐘 �。�14）流水沖洗 15分鐘至數(shù)小時 �。�15）復染 0．5%伊紅水溶液（對比染色） 2—5分鐘 逐級升濃度酒精脫水（若為醇溶伊紅可直接人90%酒精） �。�16）自來水洗（分化伊紅） 片刻 （17）95%酒精I 1－2分鐘 �。�18）95%酒精 II I—2分鐘 �。↖9）無水酒精 I 1—2分鐘 �。�20）無水酒精II l－2分鐘 透明 �。�21）二甲苯I 5—10分鐘 �。�22）二甲苯II 5—10分鐘 可作透明度試驗：在黑色背景下以光線照于切片如果見有乳白色斑片系脫水不足，需 再行脫水。 封固 （23）蓋玻片下封固 結果：胞核呈藍色，胞漿呈紅色，紅細胞呈桔紅色，其它成分呈深淺不同紅色。 染色過程中的加熱 為了縮短某些程度的染色時間，通�？捎眉訜岬姆椒▉韺崿F(xiàn)。一般是將切片或涂片浸在染色液內，連同染色皿置于37℃或56℃溫箱內至所需時間。 有的染色需用煮沸或近于煮沸的技術，可將染色液在試管內煮沸后傾在載玻片上；或在注滿染液的載玻片下面直接加熱，直接加熱會因溶劑蒸發(fā)而使染色劑發(fā)生沉淀。這可在傾人染色劑以前在切片上覆蓋一塊方形濾紙束加以防止。染色完成后沖洗切片時可以很容易地除掉濾紙而又不會損傷切片。 染色時應注意事項 一張優(yōu)質的HE染色切片，絕非僅指染色而言，它包括很多方面，首先應重視“固定”環(huán)節(jié)，其次注意脫水、透明、組織浸蠟，包埋和切片等各個步驟。一張因固定、脫水等步驟有所缺陷的切片，染色是不可能鮮艷、透明、層次分明的。解決上述各細節(jié)問題的方法已在前面各章節(jié)中均提到過。 但在進行HE染色時還應注意以下問題： 1．組織切片的脫蠟步驟應徹底，否則無論進行那種染色都會發(fā)生困難。脫蠟時間要充分，若溶蠟劑使用過久應及時更換以免效率降低，若室溫過低，可將溶蠟劑置于溫箱中進行脫蠟。 2．蘇木素染液使用一段時間后表面易出現(xiàn)亮晶狀飄浮物，這可能是液體表面的過氧化物，必須過濾除去，以防沉渣污染組織切片。蘇木素液一般染過三、四百張切片后，著色力會減弱，著色不鮮艷，呈灰藍色時應及時更換新液。 3．染色的時間長短需依據(jù)：染劑對組織的染色作用，室溫條件，切片厚薄，固定液的類別，染液的新舊而進行調節(jié)。所以在染色時必須使用顯微鏡觀察染色程度以利掌握時間。 4．分化十分重要。分化步驟的準確也是染色成敗的關鍵，若分化失當則必然引起染色不勻或過淡，過深等現(xiàn)象，因此分化后一定要鏡檢，觀察胞核是否清晰，胞漿呈淡白色。否則需再次分化，不然一旦復染后，組織會呈紫藍色即“藍蓋紅”現(xiàn)象。 5．還原液不宜過濃，若堿性太強易使組織脫落故以淡為宜。 6．伊紅宜淡染，復染過深胞核會不清晰，影響鏡檢。 7．若脫水，透明等步驟不夠徹底，則組織表面會有一層霧狀膜。若有這一現(xiàn)象，應立即更換純酒精脫水，再次透明。在潮濕的季節(jié)里應注意酒精的濃度、若降低要及時更換。 8．染色后的組織切片、要將組織四周的污染物痕跡擦掉，以免影響美觀。 9．封固劑要適量，滴加時應小心傾滴，蓋玻片要輕輕放置，以免氣泡產(chǎn)生影響鏡檢。蓋玻片大小選擇要合適，一般要大于組織塊，以防封蓋不全，蓋玻片要放正，標簽貼牢，編號清楚。從而保證切片的封藏和美觀。 10．染好的切片應妥為保存，更應避免日光照射，否則切片容易褪色。 染不上，買好點的試劑，時間從3-5分鐘，延長到10-20分鐘，多做幾次 |
3樓2020-05-09 10:06:04
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