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heshiqing168金蟲 (著名寫手)
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銀蟲 (小有名氣)

新蟲 (初入文壇)
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蘇木素-伊紅染色(hematoxylin and eosin,HE): 基本步驟 一、石蠟切片蘇木素一伊紅染色法的基本步驟: 脫蠟 。1)二甲苯I 15分鐘 。2)二甲苯II(應(yīng)完全透明) 10分鐘 逐級(jí)降濃度酒精水化 。3)無(wú)水酒精I(xiàn)(變?yōu)椴煌该鳎?1-2分鐘 。4)無(wú)水酒精I(xiàn)I 1-2分鐘 。5)95% 酒精 1-2分鐘 。6)80% 酒精 1-2分鐘 。7)自來水洗 片刻 染色 。8)蒸餾水 片刻 。9)蘇木素液染核 10—15分鐘 (10)自來水洗 片刻 。11)1%鹽酸酒精分化 0.5—1分鐘 。12)流水沖洗 片刻至數(shù)小時(shí) (13)碳酸鋰飽和水溶液反藍(lán) 1分鐘 。14)流水沖洗 15分鐘至數(shù)小時(shí) (15)復(fù)染 0.5%伊紅水溶液(對(duì)比染色) 2—5分鐘 逐級(jí)升濃度酒精脫水(若為醇溶伊紅可直接人90%酒精) 。16)自來水洗(分化伊紅) 片刻 。17)95%酒精I(xiàn) 1-2分鐘 。18)95%酒精 II I—2分鐘 。↖9)無(wú)水酒精 I 1—2分鐘 。20)無(wú)水酒精I(xiàn)I l-2分鐘 透明 。21)二甲苯I 5—10分鐘 (22)二甲苯II 5—10分鐘 可作透明度試驗(yàn):在黑色背景下以光線照于切片如果見有乳白色斑片系脫水不足,需 再行脫水。 封固 。23)蓋玻片下封固 結(jié)果:胞核呈藍(lán)色,胞漿呈紅色,紅細(xì)胞呈桔紅色,其它成分呈深淺不同紅色。 染色過程中的加熱 為了縮短某些程度的染色時(shí)間,通?捎眉訜岬姆椒▉韺(shí)現(xiàn)。一般是將切片或涂片浸在染色液內(nèi),連同染色皿置于37℃或56℃溫箱內(nèi)至所需時(shí)間。 有的染色需用煮沸或近于煮沸的技術(shù),可將染色液在試管內(nèi)煮沸后傾在載玻片上;或在注滿染液的載玻片下面直接加熱,直接加熱會(huì)因溶劑蒸發(fā)而使染色劑發(fā)生沉淀。這可在傾人染色劑以前在切片上覆蓋一塊方形濾紙束加以防止。染色完成后沖洗切片時(shí)可以很容易地除掉濾紙而又不會(huì)損傷切片。 染色時(shí)應(yīng)注意事項(xiàng) 一張優(yōu)質(zhì)的HE染色切片,絕非僅指染色而言,它包括很多方面,首先應(yīng)重視“固定”環(huán)節(jié),其次注意脫水、透明、組織浸蠟,包埋和切片等各個(gè)步驟。一張因固定、脫水等步驟有所缺陷的切片,染色是不可能鮮艷、透明、層次分明的。解決上述各細(xì)節(jié)問題的方法已在前面各章節(jié)中均提到過。 但在進(jìn)行HE染色時(shí)還應(yīng)注意以下問題: 1.組織切片的脫蠟步驟應(yīng)徹底,否則無(wú)論進(jìn)行那種染色都會(huì)發(fā)生困難。脫蠟時(shí)間要充分,若溶蠟劑使用過久應(yīng)及時(shí)更換以免效率降低,若室溫過低,可將溶蠟劑置于溫箱中進(jìn)行脫蠟。 2.蘇木素染液使用一段時(shí)間后表面易出現(xiàn)亮晶狀飄浮物,這可能是液體表面的過氧化物,必須過濾除去,以防沉渣污染組織切片。蘇木素液一般染過三、四百?gòu)埱衅,著色力?huì)減弱,著色不鮮艷,呈灰藍(lán)色時(shí)應(yīng)及時(shí)更換新液。 3.染色的時(shí)間長(zhǎng)短需依據(jù):染劑對(duì)組織的染色作用,室溫條件,切片厚薄,固定液的類別,染液的新舊而進(jìn)行調(diào)節(jié)。所以在染色時(shí)必須使用顯微鏡觀察染色程度以利掌握時(shí)間。 4.分化十分重要。分化步驟的準(zhǔn)確也是染色成敗的關(guān)鍵,若分化失當(dāng)則必然引起染色不勻或過淡,過深等現(xiàn)象,因此分化后一定要鏡檢,觀察胞核是否清晰,胞漿呈淡白色。否則需再次分化,不然一旦復(fù)染后,組織會(huì)呈紫藍(lán)色即“藍(lán)蓋紅”現(xiàn)象。 5.還原液不宜過濃,若堿性太強(qiáng)易使組織脫落故以淡為宜。 6.伊紅宜淡染,復(fù)染過深胞核會(huì)不清晰,影響鏡檢。 7.若脫水,透明等步驟不夠徹底,則組織表面會(huì)有一層霧狀膜。若有這一現(xiàn)象,應(yīng)立即更換純酒精脫水,再次透明。在潮濕的季節(jié)里應(yīng)注意酒精的濃度、若降低要及時(shí)更換。 8.染色后的組織切片、要將組織四周的污染物痕跡擦掉,以免影響美觀。 9.封固劑要適量,滴加時(shí)應(yīng)小心傾滴,蓋玻片要輕輕放置,以免氣泡產(chǎn)生影響鏡檢。蓋玻片大小選擇要合適,一般要大于組織塊,以防封蓋不全,蓋玻片要放正,標(biāo)簽貼牢,編號(hào)清楚。從而保證切片的封藏和美觀。 10.染好的切片應(yīng)妥為保存,更應(yīng)避免日光照射,否則切片容易褪色。 染不上,買好點(diǎn)的試劑,時(shí)間從3-5分鐘,延長(zhǎng)到10-20分鐘,多做幾次 |
鐵蟲 (初入文壇)

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