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2樓2020-05-08 14:40:51
博士苑
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【答案】應(yīng)助回帖
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蘇木素-伊紅染色（hematoxylin and eosin,HE）： 基本步驟 一、石蠟切片蘇木素一伊紅染色法的基本步驟： 脫蠟 �。�1）二甲苯I 15分鐘 �。�2）二甲苯II（應(yīng)完全透明） 10分鐘 逐級(jí)降濃度酒精水化 �。�3）無(wú)水酒精I(xiàn)（變?yōu)椴煌该鳎?1－2分鐘 �。�4）無(wú)水酒精I(xiàn)I 1－2分鐘 （5）95% 酒精 1－2分鐘 �。�6）80% 酒精 1－2分鐘 �。�7）自來(lái)水洗 片刻 染色 �。�8）蒸餾水 片刻 �。�9）蘇木素液染核 10—15分鐘 �。�10）自來(lái)水洗 片刻 �。�11）1%鹽酸酒精分化 0.5—1分鐘 �。�12）流水沖洗 片刻至數(shù)小時(shí) �。�13）碳酸鋰飽和水溶液反藍(lán) 1分鐘 �。�14）流水沖洗 15分鐘至數(shù)小時(shí) �。�15）復(fù)染 0．5%伊紅水溶液（對(duì)比染色） 2—5分鐘 逐級(jí)升濃度酒精脫水（若為醇溶伊紅可直接人90%酒精） �。�16）自來(lái)水洗（分化伊紅） 片刻 �。�17）95%酒精I(xiàn) 1－2分鐘 （18）95%酒精 II I—2分鐘 �。↖9）無(wú)水酒精 I 1—2分鐘 �。�20）無(wú)水酒精I(xiàn)I l－2分鐘 透明 �。�21）二甲苯I 5—10分鐘 �。�22）二甲苯II 5—10分鐘 可作透明度試驗(yàn)：在黑色背景下以光線照于切片如果見(jiàn)有乳白色斑片系脫水不足，需 再行脫水。 封固 �。�23）蓋玻片下封固 結(jié)果：胞核呈藍(lán)色，胞漿呈紅色，紅細(xì)胞呈桔紅色，其它成分呈深淺不同紅色。 染色過(guò)程中的加熱 為了縮短某些程度的染色時(shí)間，通常可用加熱的方法來(lái)實(shí)現(xiàn)。一般是將切片或涂片浸在染色液內(nèi)，連同染色皿置于37℃或56℃溫箱內(nèi)至所需時(shí)間。 有的染色需用煮沸或近于煮沸的技術(shù)，可將染色液在試管內(nèi)煮沸后傾在載玻片上；或在注滿染液的載玻片下面直接加熱，直接加熱會(huì)因溶劑蒸發(fā)而使染色劑發(fā)生沉淀。這可在傾人染色劑以前在切片上覆蓋一塊方形濾紙束加以防止。染色完成后沖洗切片時(shí)可以很容易地除掉濾紙而又不會(huì)損傷切片。 染色時(shí)應(yīng)注意事項(xiàng) 一張優(yōu)質(zhì)的HE染色切片，絕非僅指染色而言，它包括很多方面，首先應(yīng)重視“固定”環(huán)節(jié)，其次注意脫水、透明、組織浸蠟，包埋和切片等各個(gè)步驟。一張因固定、脫水等步驟有所缺陷的切片，染色是不可能鮮艷、透明、層次分明的。解決上述各細(xì)節(jié)問(wèn)題的方法已在前面各章節(jié)中均提到過(guò)。 但在進(jìn)行HE染色時(shí)還應(yīng)注意以下問(wèn)題： 1．組織切片的脫蠟步驟應(yīng)徹底，否則無(wú)論進(jìn)行那種染色都會(huì)發(fā)生困難。脫蠟時(shí)間要充分，若溶蠟劑使用過(guò)久應(yīng)及時(shí)更換以免效率降低，若室溫過(guò)低，可將溶蠟劑置于溫箱中進(jìn)行脫蠟。 2．蘇木素染液使用一段時(shí)間后表面易出現(xiàn)亮晶狀飄浮物，這可能是液體表面的過(guò)氧化物，必須過(guò)濾除去，以防沉渣污染組織切片。蘇木素液一般染過(guò)三、四百?gòu)埱衅�，著色力�?huì)減弱，著色不鮮艷，呈灰藍(lán)色時(shí)應(yīng)及時(shí)更換新液。 3．染色的時(shí)間長(zhǎng)短需依據(jù)：染劑對(duì)組織的染色作用，室溫條件，切片厚薄，固定液的類別，染液的新舊而進(jìn)行調(diào)節(jié)。所以在染色時(shí)必須使用顯微鏡觀察染色程度以利掌握時(shí)間。 4．分化十分重要。分化步驟的準(zhǔn)確也是染色成敗的關(guān)鍵，若分化失當(dāng)則必然引起染色不勻或過(guò)淡，過(guò)深等現(xiàn)象，因此分化后一定要鏡檢，觀察胞核是否清晰，胞漿呈淡白色。否則需再次分化，不然一旦復(fù)染后，組織會(huì)呈紫藍(lán)色即“藍(lán)蓋紅”現(xiàn)象。 5．還原液不宜過(guò)濃，若堿性太強(qiáng)易使組織脫落故以淡為宜。 6．伊紅宜淡染，復(fù)染過(guò)深胞核會(huì)不清晰，影響鏡檢。 7．若脫水，透明等步驟不夠徹底，則組織表面會(huì)有一層霧狀膜。若有這一現(xiàn)象，應(yīng)立即更換純酒精脫水，再次透明。在潮濕的季節(jié)里應(yīng)注意酒精的濃度、若降低要及時(shí)更換。 8．染色后的組織切片、要將組織四周的污染物痕跡擦掉，以免影響美觀。 9．封固劑要適量，滴加時(shí)應(yīng)小心傾滴，蓋玻片要輕輕放置，以免氣泡產(chǎn)生影響鏡檢。蓋玻片大小選擇要合適，一般要大于組織塊，以防封蓋不全，蓋玻片要放正，標(biāo)簽貼牢，編號(hào)清楚。從而保證切片的封藏和美觀。 10．染好的切片應(yīng)妥為保存，更應(yīng)避免日光照射，否則切片容易褪色。 染不上，買好點(diǎn)的試劑，時(shí)間從3-5分鐘，延長(zhǎng)到10-20分鐘，多做幾次 |
3樓2020-05-09 10:06:04
myy15
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4樓2020-05-11 08:52:33
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