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癲狂版鐵蟲 (初入文壇)
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[求助]
C18色譜柱可能被蛋白質(zhì)污染了，常規(guī)沖柱方法都沒有用該咋辦 已有2人參與
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前段時(shí)間在做代謝實(shí)驗(yàn)，由于普通的甲醇乙腈變性蛋白質(zhì)使我的目標(biāo)化合物無法檢測到，于是參考文獻(xiàn)嘗試少量甲酸變性，結(jié)果最近柱壓升的厲害，雖然本來也很高了。色譜柱為ACE excel3 C18-AR，目前初始95：5水乙腈，0.6流速柱壓240bar+。這個(gè)條件是更換了預(yù)柱柱心，液相脫氣閥的一個(gè)柱芯后的柱壓。 嘗試了幾種沖洗方法： 1、高水相低流速正沖； 2、純甲醇低流速正沖； 3、咨詢技術(shù)支持后90：10乙腈水，低流速逐漸升高反沖； 4、（技術(shù)支持）85：15異丙醇水低流速反沖。 目前看效果都不明顯。 試了這么多辦法，很多不得不用的辦法都用上了還是沒效果，目前還是覺得最有可能的污染物是蛋白質(zhì)，不過不能確定污染物是否只在篩板還是已經(jīng)進(jìn)到柱頭里了，非常絕望，求助一下各位大神，還有什么除了換柱子的其他路子再拯救一下，謝謝大家了  |
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5樓2020-04-08 09:42:27
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6樓2020-04-08 16:16:11
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謝謝@柳絮蟲 和@lifucheng兩個(gè)老師，用0.1%的tfa溶液低流速?zèng)_柱子以后柱壓一段時(shí)間內(nèi)有下降，但是柱壓仍然處于偏高狀態(tài)，最后卸下篩板超聲，把柱頭填料刮去一點(diǎn)點(diǎn)后柱壓基本恢復(fù)，比之前略高一點(diǎn)。重新測的代謝前的樣品，出峰時(shí)間大體一致，柱效貌似更高了，謝謝兩位老師 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
7樓2020-04-14 16:10:25
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