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C18色譜柱可能被蛋白質(zhì)污染了,常規(guī)沖柱方法都沒有用該咋辦 已有2人參與
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前段時間在做代謝實驗,由于普通的甲醇乙腈變性蛋白質(zhì)使我的目標(biāo)化合物無法檢測到,于是參考文獻嘗試少量甲酸變性,結(jié)果最近柱壓升的厲害,雖然本來也很高了。色譜柱為ACE excel3 C18-AR,目前初始95:5水乙腈,0.6流速柱壓240bar+。這個條件是更換了預(yù)柱柱心,液相脫氣閥的一個柱芯后的柱壓。 嘗試了幾種沖洗方法: 1、高水相低流速正沖; 2、純甲醇低流速正沖; 3、咨詢技術(shù)支持后90:10乙腈水,低流速逐漸升高反沖; 4、(技術(shù)支持)85:15異丙醇水低流速反沖。 目前看效果都不明顯。 試了這么多辦法,很多不得不用的辦法都用上了還是沒效果,目前還是覺得最有可能的污染物是蛋白質(zhì),不過不能確定污染物是否只在篩板還是已經(jīng)進到柱頭里了,非常絕望,求助一下各位大神,還有什么除了換柱子的其他路子再拯救一下,謝謝大家了 |
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