 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1558 | 回復: 3 | |||
| 當前只顯示滿足指定條件的回帖，點擊這里查看本話題的所有回帖 | |||
[交流]
克隆某未知基因片段，高保真酶仍然遇到突變并改變氨基酸，就問怎么辦 已有3人參與
|
|||
|
基因克隆新手求助： 我最近想要研究某個昆蟲的基因，由于并非模式生物，沒有任何之前研究，唯一可以用的reference就是組學拼接data。設計引物擴增長度大約1500bp，共2個片段，從cDNA文庫中擴增，一開始用LA Taq，后來在某合作者（PI）建議下用高保真酶又做了一次。高保真酶是NEB的Q5高保真酶（從未開封但在負20度放置了3年），用普通Taq加A�？寺≥d體用的是pGEM-T Easy，感受態(tài)自制DH5a。 結(jié)果是片段1，LA擴增產(chǎn)物連接挑到1個好的克隆，Q5挑到2個。序列完全一樣，但是對比reference卻發(fā)現(xiàn)有5個位點不同。大致效果如下： FG1: Ref: G C A T LA-11: A T C C q5-01: A T C C q5-03: A T C C 片段2，僅用了Q5高保真酶，挑了3個克隆，但卻發(fā)現(xiàn)這三個克隆彼此和reference都有較多區(qū)別，其中2個氨基酸發(fā)生改變。 Ref: G A A C A Q2: A G A T G Q3: A G G T A Q4: A G A T A 我的目的是連接兩條片段并進行表達，因此序列正確與否十分重要。請問 1. FG1的三個克隆序列都一致且來源于不同PCR體系，是否可以認為其序列是正確的，而reference的結(jié)果需要修正？ 2. FG2三個克隆和reference序列不同且彼此都不同，該如何解決？差異到底是PCR突變還是reference本身問題。 謝謝！�。� |
回復此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗中的趣事：實驗器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗中的趣事：和實驗材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復
-
化學工程及工業(yè)化學論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有272人回復
-
蛋白質(zhì)檢測：精準分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴謹設計，解析生命機制的重要載體
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標南京
已經(jīng)有0人回復
匿名
用戶注銷 (正式寫手)
- 應助: 128 (高中生)
- 金幣: 4550.4
- 散金: 50
- 紅花: 22
- 帖子: 934
- 在線: 645.1小時
- 蟲號: 0
- 注冊: 2011-10-17
- 性別: GG
- 專業(yè): 植物遺傳學
4樓2020-03-18 17:29:03
世外清風
鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)
- 應助: 63 (初中生)
- 貴賓: 0.082
- 金幣: 8956.3
- 散金: 1169
- 紅花: 12
- 帖子: 3145
- 在線: 873.9小時
- 蟲號: 714541
- 注冊: 2009-03-04
- 性別: GG
- 專業(yè): 動物遺傳學
2樓2020-03-14 08:44:26
3樓2020-03-15 22:28:24
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 材料學碩318求調(diào)劑 +19 | February_Feb 2026-03-01 | 21/1050 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 接收調(diào)劑 +18 | 津萌津萌 2026-03-02 | 27/1350 |
|
|
|
[考研] 【求調(diào)劑】293分環(huán)境工程求調(diào)劑材料/化工，服從調(diào)劑，抗壓能力強！ +6 | xiiiia 2026-03-04 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 環(huán)境工程專碩307 一志愿211 四六級已過 求調(diào)劑 +5 | ccc! 2026-03-03 | 6/300 |
|
|
|
[基金申請] 沒有青基直接申請面上，感覺自己瘋了 +6 | kevin63t 2026-03-02 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 化學工程求調(diào)劑 +10 | 化工人999 2026-03-04 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 267化工調(diào)劑求助 +5 | 聰少OZ 2026-03-04 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0855機械工程324求調(diào)劑 +3 | 鄭SK 2026-03-02 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 281求調(diào)劑 +3 | 我是小小蔥蔥 2026-03-03 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 281求調(diào)劑 +3 | Y?l?h 2026-03-04 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 085600求調(diào)劑 +4 | LRZZZZZZ 2026-03-02 | 6/300 |
|
|
|
[論文投稿]
EST拒稿重投
 5+3
|
15102603076 2026-03-02 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 主題 +3 | realstar2006 2026-02-27 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 江蘇省農(nóng)科院招調(diào)劑1名 +5 | Qwertyuop 2026-03-01 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 清華大學 材料與化工 353分求調(diào)劑 +5 | awaystay 2026-03-02 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 288求調(diào)劑 +3 | 少71.8 2026-03-02 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 【2026 碩士調(diào)劑】課題組 招收調(diào)劑生 +3 | 考研版棒棒 2026-03-02 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0856求調(diào)劑285 +11 | 呂仔龍 2026-02-28 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 272求調(diào)劑 +6 | 田智友 2026-02-28 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 290求調(diào)劑 +9 | 材料專碩調(diào)劑； 2026-02-28 | 11/550 |
|