 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1557 | 回復(fù): 3 | |||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | |||
huajiachicat新蟲 (初入文壇)
|
[交流]
克隆某未知基因片段，高保真酶仍然遇到突變并改變氨基酸，就問(wèn)怎么辦 已有3人參與
|
||
|
基因克隆新手求助： 我最近想要研究某個(gè)昆蟲的基因，由于并非模式生物，沒(méi)有任何之前研究，唯一可以用的reference就是組學(xué)拼接data。設(shè)計(jì)引物擴(kuò)增長(zhǎng)度大約1500bp，共2個(gè)片段，從cDNA文庫(kù)中擴(kuò)增，一開始用LA Taq，后來(lái)在某合作者（PI）建議下用高保真酶又做了一次。高保真酶是NEB的Q5高保真酶（從未開封但在負(fù)20度放置了3年），用普通Taq加A�？寺≥d體用的是pGEM-T Easy，感受態(tài)自制DH5a。 結(jié)果是片段1，LA擴(kuò)增產(chǎn)物連接挑到1個(gè)好的克隆，Q5挑到2個(gè)。序列完全一樣，但是對(duì)比reference卻發(fā)現(xiàn)有5個(gè)位點(diǎn)不同。大致效果如下： FG1: Ref: G C A T LA-11: A T C C q5-01: A T C C q5-03: A T C C 片段2，僅用了Q5高保真酶，挑了3個(gè)克隆，但卻發(fā)現(xiàn)這三個(gè)克隆彼此和reference都有較多區(qū)別，其中2個(gè)氨基酸發(fā)生改變。 Ref: G A A C A Q2: A G A T G Q3: A G G T A Q4: A G A T A 我的目的是連接兩條片段并進(jìn)行表達(dá)，因此序列正確與否十分重要。請(qǐng)問(wèn) 1. FG1的三個(gè)克隆序列都一致且來(lái)源于不同PCR體系，是否可以認(rèn)為其序列是正確的，而reference的結(jié)果需要修正？ 2. FG2三個(gè)克隆和reference序列不同且彼此都不同，該如何解決？差異到底是PCR突變還是reference本身問(wèn)題。 謝謝！��！ |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有195人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
3樓2020-03-15 22:28:24
世外清風(fēng)
鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)
- 應(yīng)助: 63 (初中生)
- 貴賓: 0.082
- 金幣: 8956.3
- 散金: 1169
- 紅花: 12
- 帖子: 3145
- 在線: 873.9小時(shí)
- 蟲號(hào): 714541
- 注冊(cè): 2009-03-04
- 性別: GG
- 專業(yè): 動(dòng)物遺傳學(xué)
2樓2020-03-14 08:44:26
匿名
用戶注銷 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 128 (高中生)
- 金幣: 4550.4
- 散金: 50
- 紅花: 22
- 帖子: 934
- 在線: 645.1小時(shí)
- 蟲號(hào): 0
- 注冊(cè): 2011-10-17
- 性別: GG
- 專業(yè): 植物遺傳學(xué)
4樓2020-03-18 17:29:03
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +3 | 曼殊2266 2026-03-05 | 3/150 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 282求調(diào)劑 +3 | 夕～日 2026-03-05 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 070300化學(xué) 280 一志愿太原理工 求調(diào)劑 +8 | 拾玖壹 2026-03-04 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 環(huán)境調(diào)劑 +7 | 柒槿levana 2026-03-01 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 266求調(diào)劑 +7 | 哇塞王帥 2026-03-03 | 7/350 |
|
|
|
[考研]
 一志愿中南大學(xué)理學(xué)化學(xué)
+6
|
15779376950 2026-03-01 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 292求調(diào)劑 +9 | yhk_819 2026-02-28 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 一志愿西工大材料學(xué)，英一數(shù)二總分321分，求調(diào)劑。 +3 | zz05zz 2026-03-02 | 5/250 |
|
|
|
[基金申請(qǐng)] 請(qǐng)問(wèn)大家，研究風(fēng)險(xiǎn)與應(yīng)對(duì)措施那里， 大家都怎么寫呢 ？ +3 | cauasen 2026-03-02 | 3/150 |
|
|
|
[考研]
材料工程專碩283求調(diào)劑
 5+8
|
，�。� 2026-03-02 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 材料工程求調(diào)劑 +3 | 1431251 2026-03-03 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 調(diào)劑 +5 | 13853210211 2026-03-02 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 298求調(diào)劑 +7 | axyz3 2026-02-28 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 0854復(fù)試調(diào)劑 276 +5 | wmm9 2026-03-01 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 298求調(diào)劑 +10 | 人間唯你是清歡 2026-02-28 | 14/700 |
|
|
|
[考研] 322求調(diào)劑 +3 | 熊境喆 2026-03-01 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 272求調(diào)劑 +6 | 田智友 2026-02-28 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 291分工科求調(diào)劑 +9 | science餓餓 2026-03-01 | 10/500 |
|
|
|
[考博] 26申博 +4 | 想申博！ 2026-02-26 | 6/300 |
|
|
|
[論文投稿]
求助coordination chemistry reviews 的寫作模板
10+3
|
ljplijiapeng 2026-02-27 | 4/200 |
|