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[求助]
融合蛋白進行酶切后，目的蛋白不流穿 已有2人參與
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我的蛋白具組氨酸標簽，鎳柱純化后得到的融合蛋白進行酶切，之后再上鎳柱純化想要得到我的目的蛋白，結果目的蛋白并不流穿。我也做過一些改進方法，將柱材料減少一部分之后，目的蛋白會流傳下來，但是仍然有部分還在柱子里，求助各位大神們有沒有什么改進的方法啊。感謝感謝 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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6樓2024-01-05 10:26:53
sannny
新蟲 (正式寫手)
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- 注冊: 2014-04-21
- 專業(yè): 蛋白質組學
【答案】應助回帖
感謝參與，應助指數(shù) +1
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樣品里面加5-25mM咪唑�；蛘哂�25mM咪唑進行洗脫，可以把目的蛋白洗下來。很多氨基酸都會和鎳結合的，只是結合強度沒有六個連續(xù)組氨酸那么強，這也是鎳柱純化通常純度較差的原因。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2019-07-27 07:32:26
3樓2019-07-27 14:05:34
cloveseven
銀蟲 (初入文壇)
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- 專業(yè): 生物大分子結構與功能
4樓2019-10-11 22:52:23
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