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Kao、拉拉新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
融合蛋白進(jìn)行酶切后，目的蛋白不流穿 已有2人參與
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我的蛋白具組氨酸標(biāo)簽，鎳柱純化后得到的融合蛋白進(jìn)行酶切，之后再上鎳柱純化想要得到我的目的蛋白，結(jié)果目的蛋白并不流穿。我也做過(guò)一些改進(jìn)方法，將柱材料減少一部分之后，目的蛋白會(huì)流傳下來(lái)，但是仍然有部分還在柱子里，求助各位大神們有沒(méi)有什么改進(jìn)的方法啊。感謝感謝 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
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sannny
新蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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樣品里面加5-25mM咪唑�；蛘哂�25mM咪唑進(jìn)行洗脫，可以把目的蛋白洗下來(lái)。很多氨基酸都會(huì)和鎳結(jié)合的，只是結(jié)合強(qiáng)度沒(méi)有六個(gè)連續(xù)組氨酸那么強(qiáng)，這也是鎳柱純化通常純度較差的原因。 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
2樓2019-07-27 07:32:26
Kao、拉拉
新蟲(chóng) (初入文壇)
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3樓2019-07-27 14:05:34
cloveseven
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樓主，您的問(wèn)題解決了么？我目前也遇到同樣問(wèn)題，使用高于30mM的咪唑后目的蛋白和蛋白酶就都洗脫下來(lái)了 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
4樓2019-10-11 22:52:23
ECUST_CAPF
銅蟲(chóng) (小有名氣)
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5樓2020-03-12 14:26:31
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6樓2024-01-05 10:26:53
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