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[交流]
逆轉(zhuǎn)錄相關(guān)
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| 只知道有實(shí)時(shí)熒光定量PCR，不知道逆轉(zhuǎn)錄PCR是怎么一回事，是先逆轉(zhuǎn)錄后再做實(shí)時(shí)熒光定量PCR嗎？可是如果是這樣，要怎么確定樣本中的mRNA中的含量呀？怎么轉(zhuǎn)換一下呢？沒(méi)有做過(guò)逆轉(zhuǎn)錄，請(qǐng)指教！ |
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去大西南
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總RNA提完后先測(cè)濃度，根據(jù)濃度把RNA定量到1μg，然后去除基因組DNA，接著逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，最后才是熒光定量PCR 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
3樓2019-05-23 10:08:24
aq7068
新蟲(chóng) (小有名氣)
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反轉(zhuǎn)錄，是在隨機(jī)引物或特異的引物的引導(dǎo)下反轉(zhuǎn)錄酶沿著mRNA單鏈合成互補(bǔ)的cDNA序列 熒光Pcr用的酶只能以DNA鏈為模版延伸擴(kuò)增 也可以用一部法將兩個(gè)酶加在一個(gè)反應(yīng)管，但是會(huì)影響到擴(kuò)增效率。 mRNA的表達(dá)量可以用絕對(duì)定量和相對(duì)定量測(cè)得 相對(duì)定量需要內(nèi)參，絕對(duì)定量需要標(biāo)準(zhǔn)品做標(biāo)準(zhǔn)曲線  發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
2樓2019-05-22 20:04:09
匿名
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4樓2019-12-23 10:34:55
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